先天性小耳畸形相关差异表达基因的筛选和验证研究.pdf

先天性小耳畸形相关差异表达基因的筛选与始证研穹。。 中文摘要 册舢Ⅷ川㈣ⅢllIIIⅧ¨Ⅷ㈠ 口^^ Y2818123 HI：PJ： 通过对先天性小耳畸形残耳软骨组织及对侧正常耳软骨组织的芯片检测，筛选 小耳畸形相关差异表达基因，通过生物信息学分析选择部分与小耳畸形关系较密切 的基因，通过qRT-PCR和Westernblotting方法进一步验证其表达变化，为深入研 究先天性小耳畸形的分子机制及其防治提供科学依据。 方法： 标本源于中国医学科学院整形外科医院收治的单侧先天性小耳畸形患者。患耳 均无感染及软骨炎等征象。每例标本均于手术过程中取残耳软骨组织(术中剔除的 其中以残耳软骨组织为实验组，正常侧耳软骨组织为对照组。取材后立即将软骨组 织于液氮中保存或直接提取总RNA和总蛋白。 HumanLncRNA V3．0筛选单侧先 通过美国Agilent公司的ArraystarMicroarray 天性小耳畸形患者残耳软骨组织(实验组)和正常侧耳软骨组织(对照组)的差异 表达基因，根据生物信息学分析选择与小耳畸形更为相关的ZNF44、Wdr82和 real．time chain FGFR2基因，通过实时定量聚合酶链反应(quantitativepolymerase reaction，qRT-PCR)和Westernblotting方法进一步验证其表达情况。 结果： RNA具有良好的完整性和纯度。 2．从杂交图上可见密集的cy3绿色荧光呈规则的圆形，杂交点间没有重叠现象， 信号明显，图像背景低，无灰尘噪声信号。 3．芯片数据分析结果显示：先天性小耳畸形软骨组织中差异表达基因共553条， 其中表达下调的基因433条，如锌指蛋白44(zinc 44，ZNF44)基 fingerprotein 因和WD40重复蛋白82(WD4082，Wdr82)基因分别下调2．oo repeatprotein blast factor2，FGF．2)基因上调2．64倍。这些差异表达基因涉及胚胎发 growth 育、肢体形成、骨骼发育及信号转导等生物学事件。 4．qRT-PCR方法验证差异表达基因mRNA水平的表达，结果显示：与对照组相比， 万方数据 5．Western blotting法验证差异表达基因蛋白水平的表达，结果显示：与对照组相比， 结果一致。 结论： 1．小耳畸形残耳软骨组织与对侧正常软骨组织比较，mRNA表达谱发生了较大的 改变。 可能与先天性小耳畸形发病有关。 关键词： 先天性小耳畸形；差异表达基因；锌指蛋白44基因；WD40重复蛋白82 基因；成纤维细胞生长因子2基因 4 万方数据 Theresearchof andverificationonthe screening differentially relatedto microtia expressedgenes congenital Absract objeetives： Inthis aretoscreenthe study,the inth