microRNA-21在甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中作用.pdf

摘要 摘 要 背景 癌、胃癌、胶质母细胞瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、胰腺癌、胆管癌、肝癌、前 列腺癌等癌症中均呈现过度表达。特别是在人类的脑胶质母细胞瘤(高度恶性) 中，miR．21的表达水平可以高出其他非癌组织610倍；但是，在正常成人脑白 质里，miR．21也有低水平表达。由此看来，miR一21的表达没有特别明显的特异 性。但在人的乳腺癌中，miR．21的表达显著上升，这就提示我们miR．21在某些 肿瘤的发展发生中可能起到一个癌基因的作用。大量研究表明：miR．21促进肿 瘤细胞转化的功能是依靠抑制抑癌基因即程序性细胞死亡因子4来实现的。程序 性细胞凋亡因子4(PDCD4)是近年来发现的一种新型的肿瘤抑制因子，它是P13K ／Akt信号通路的下游分子，PDCD4是通过抑制丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激 (T细胞因子)在结肠肿瘤细胞依赖的转录抑制，这些结果提供了分子解释 PDCD4抑制肿瘤侵袭的原因。因此，PDCD4具有抑制肿瘤生成、促进细胞凋亡 的作用。 本实验通过在甲状腺乳头状癌TPC．1中瞬时转染miR．21，之后用免疫组化以 及流式细胞仪技术检测转染前后细胞的凋亡和增殖以及PDCD4的表达。从而探 讨两者之间的关系及在它们甲状腺乳头状癌中的作用机制。 目的 2000TM进行瞬时转染真核重组质粒 通过用脂质体转染试齐ULipofectamine 达，这为接下来进一步研究miR．21在甲状腺乳头状癌细胞TPC．1中的的凋亡、转 移、增殖中的作用及其基因调控机制打下坚实的基础。 摘要 方法 2000TM将miR一21进行瞬时转染至甲状腺乳头状癌细 (1)经Lipofectamine ’ 胞TPC．1中； 免疫组化检测转染后PDCD4表达情况； 胞增殖变化曲线； (4)采用流式细胞法检测瞬时转染后TPC．1细胞凋亡，观察转染前后细胞 凋亡变化图像。 9±甲 ：日木 (1)经脂质体传染试剂将miR．21进行瞬时转染至甲状腺乳头状癌细胞 TPC一1中后，转染后的TPC．1细胞中有较大比例的梭型细胞表达绿色荧光蛋白： (2)经免疫组化检测转染后瞬时转染miR．21组中，转染组细胞膜呈棕褐 色，PDCD4的表达明显高于对照组； 组和空质粒组的细胞数都有所增加，但转染组的TPC一1细胞增殖的更快。 (PO．05)： (4)转染miR．21的细胞凋亡率与对照组之间有显著差异性，凋亡率明显减 少。 结论 示miR．21的高表达可促进甲状腺乳头状癌的发展，这种作用可能是通过下调 PDCD4蛋白的表达来实现。 亡 n Abstract Abstract Background oneoftheearliestdiscovered islocated RNA,it microRNA-21(miR-21)is tiny the chromosomeFRAl7Bthebrittle has 17q23．2 fragment regionindependent units．Inrecent research：miR一21showed inbreast transcription years overexpression cancer，stomach cell cancer,lung cancer’glioblastoma neuroendocrine