大黄酸对破骨细胞形成、分化和凋亡的影响.pdfVIP

中文摘要 ：各；1细胞培养：用传代细胞继续培养，待瓶底细胞密度达到90％后，用 0．25％胰酶+EDTA将细胞重悬，收集细胞。将所收集的细胞移至离心管内 培养液，充分吹打混匀后形成单细胞悬液，用细胞计数板计算细胞数，计 RANKL 00单位／ml和链霉素1 50ng／ml、M．CSF20ng／ml、青霉素1 00ug／ml。 悬液5000L。 3．2药物的添加：在24孔培养板第一孔为对照组，不添加任何药物。第 二孔选取对破骨细胞形成抑制最明显的大黄酸浓度为添加药物组(10。3 mol／L)。 3．3流式细胞术检测细胞凋亡：细胞培养至第5天后，用0．25％胰酶+EDTA 将细胞重悬，分别收集对照组与药物添加组细胞，置于离心机内离心5 lx缓冲液将 心机内再离心5分钟(1000转／分)，弃去上清液。以3009L V5ul、Pi10 细胞重悬，每管加入Annexin ul，静置30分钟，再加入2001a．L lx缓冲液，立刻将细胞置于流式细胞仪检测细胞凋亡。重复流式细胞术 检测细胞凋亡3次。 4统计学分析：使用SPSSl3．0软件进行统计学分析。数据处理采用非参 数检验的方差分析和S．N．K检验，流式细胞结果采用t检验。 结果： 1破骨细胞的形态学特征细胞培养第一天各组均未见破骨细胞形成；自 培养第二天开始对照组可见少量破骨细胞形成，实验组无变化；培养至第 三天实验组可见少量破骨细胞形成；培养至第五天，各组均可见到成熟破 骨细胞。进行TRAP染色后，光镜下可见到大量成熟的破骨细胞，其形态 学特征为：细胞体积较大，呈漏斗形、椭圆形、油煎蛋样、条索状或不规 则形。细胞浆丰富，呈紫红色，细胞核较大，数目达几个甚至多达十几个， 核仁清晰，有的细胞浆内可见空泡结构。 2大黄酸对破骨细胞的形成和分化具有抑制作用，高浓度比低浓度在相同 条件下形成的破骨细胞数目少。 在小鼠单核细胞RAW264．7系细胞株培 养系中，培养板第一列(对照组)没有添加药物，最终破骨细胞形成最多： 中文摘要 第-N；bn入浓度为100mol／L大黄酸，形成的破骨细胞最少；第三、四、 破骨细胞的形成，并且形成破骨细胞的数目较第二列多，并且呈梯度递增， 与第一、二列相比统计学有显著性差异(PO．05)，说明大黄酸对破骨细胞 的形成和分化具有抑制作用。 3大黄酸是通过细胞凋亡途径影响破骨细胞的形成和分化的。 流式细胞 散点图显示与对照组比较，实验组散点在Q2、Q4象限分布增多，并且对 照组和实验组之间有统计学意义，证明大黄酸是通过细胞凋亡途径影响破 骨细胞的形成和分化的，并且主要是影响细胞的中晚期凋亡。 结论： 1．大黄酸可以抑制破骨细胞的形成和分化。 2．大黄酸通过细胞凋亡途径影响破骨细胞的形成和分化。 3．大黄酸主要影响细胞的中晚期凋亡。 关键词：大黄酸；破骨细胞；细胞培养；流式细胞 英文摘要 Theeffectof rheinonform and ofosteoclast． apoptosis ABSTRACT mouse RAW264．7cloneculture obiective：UsingMonocytes system to theeffectofRheinonformationand study differentiationofosteoclast andatthesame