第十章 吸光光度法-2013.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 10.4.2 显色反应条件选择 * 6. 干扰及其消除方法：试样中存在的干扰物质会影响显色反应，造成光度分析的误差 消除方法包括： a. 控制溶液酸度 b. 加入掩蔽剂 c. 利用氧化还原反应，改变干扰离子的价态 d. 用参比溶液消除显色剂和某些共存有色离子的干扰。 e. 选择适当的波长 f. 当溶液中存在有消耗显色剂的干扰离子时，可通过增加显色剂的用量来消除干扰。 h. 预先分离 10.5 其他 吸光光度法 * 目视比色法 * 目视比色法：用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。优点是操作简便，适宜于野外和现场快速测定。可在复合光-白光下进行测定，某些不符合朗伯-比尔定律的显色反应，仍可用该法进行测定。主要缺点是准确度不高，标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。 标准系列: (分别取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL标准溶液 5.0mg/mL ) 试样 示差吸光光度法 * 示差吸光光度法（differential spectrophotometry ） 吸光光度法一般仅适用于微量组分的测定，当待测组分浓度过高或过低，会引起很大的测量误差，导致准确度降低。示差吸光光度法可克服这一缺点。 示差吸光光度法用比待测溶液浓度稍低的标准溶液作参比。设参比溶液浓度为cs，待测溶液浓度为cx。 DA与Dc成正比。 示差吸光光度法 * A=1.3，1.0 A=0.3， 0 示差吸光光度法 * 用普通分光光度法测得标液c1的透光率为20%，试液的透光率为12%，若以示差法测定，以c1为参比，将参比溶液的吸光值A调节为0，则试液的透光率为： (A ) 40% ( B) 50% (C) 60% (D) 70% 示差吸光光度法举例 C 双波长 吸光光度分析法 * 两束不同波长的单色光以一定的时间间隔交替地照射同一吸收池，测量并记录两者吸光度的差值。这样可以从分析波长的信号中扣除来自参比波长的信号，消除各种干扰，得到待测组分的含量。方法的灵敏度、选择性及测量的精密度高。被广泛用于环境试样及生物试样的分析。 双波长吸光光度法 (double-wavelengh) 双波长 吸光光度分析法 * ΔA与吸光物质浓度成正比。由于只用一个吸收池，以试液本身对某一波长的光的吸光度为参比，消除了因试液与参比液及两个吸收池之间的差异引起的测量误差，提高测量的准确度。 设波长为l1和l2的两束单色光强度相等 双波长吸光光度法 (double-wavelengh) 双波长 吸光光度分析法 * ?2 ?1 A ? X Y ∵ ∴ Y 的存在不干扰 X 的测定 双波长吸光光度法原理 几种类型的分光光度计比较 * 几种其他的 吸光光度分析法 * 导数分光光度法Derivative Spectrometry 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。 吸收光谱曲线 一阶导数光谱曲线 二阶导数光谱曲线 紫外-可见分子吸收光谱的发展 1、光声光谱 激光光源 吸收池 光声传感器 记录装置 不仅可用于液体样品、也可用于固体样品 2、长光程紫外-可见分光光度计 激光光源 吸收池 记录装置 * 双 叉 光 纤 3、光导纤维传感器 * 4、表面等离子共振（SPR） 原理 表面等离子共振（SPR）是一种物理现象，当入射光以临界角入射到两种不同折射率的介质界面（比如玻璃表面的金或银镀层）时，可引起金属自由电子的共振，由于电子吸收了光能量，从而使反射光在一定角度内大大减弱。其中，使反射光在一定角度内完全消失的入射角称为SPR角。SPR随表面折射率的变化而变化，而折射率的变化又和结合在金属表面的生物分子质量成正比。因此可以通过获取生物反应过程中SPR角的动态变化，得到生物分子之间相互作用的特异性信号。 * * * * * * * * * * * * * * * * * 10.3.2 对朗伯-比尔定律的偏离 * 在吸光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当浓度较高时，标准曲线明显弯曲。 偏离朗伯-比尔定律的主要原因： 介质不均匀引起的偏离 非单色光引起的偏离 由于溶液本身的化学反应(解离、缔合、形成新化合物或互变异构等化学变化)引起的偏离 * ?1 ?2 ? A1 A2 A 吸收定律只适合单色光 设 当?1 = ?2 = ? 当 时，出现偏离 A A C 0 ?1 ?1 + ?2 350 380 CrO4 2-