X7菊花的组织培养课题.pptVIP

* * * * 专题三 植物的组织培养技术 课题1 菊花的组织培养 植物组织培养技术 在无菌的条件下，将离体的植物细胞、组织或器官(外植体)置于培养基中，在适宜的条件下培养成完整植株的技术。 植物组织培养的条件： 离体、营养物质、激素和其他外界条件 适宜的温度、光照、PH、氧气等 细胞分化 在个体发育过程中，相同细胞增殖产生的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程。 原因： 基因选择性表达的结果 结果： 形成结构和功能不同的细胞和组织 细胞的全能性 已分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能。 原因： 每一个植物细胞都包含有该物种全套的遗传物质。 —组织培养的原理 菊花是菊科菊属的多年生宿根草本植物。 菊花的组织培养具有取材少、培养周期短、无病毒等优点。 植物组织培养的基本过程 影响植物组织培养的因素 菊花组织培养的具体过程 本节聚焦 一、植物的组织培养的基本过程 离体组织或细胞 试管苗 脱分化 愈伤组织 芽 根 再分化 3、愈伤组织是脱分化过程形成的排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。 2、脱分化(去分化)：离体的植物组织或细胞通过细胞分裂产生愈伤组织的过程。 4、再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，重新分化成根或芽等器官的过程。 1、外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。 相关名词： 二、影响植物组织培养的因素 选取原则：①分裂旺盛、分化能力强(全能性高)；②未被细菌或病毒感染 大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素等 1、外植体的选取 2、适宜的培养基（MS培养基) 思考：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 微量元素、大量元素：提供植物细胞生活所必需的无机盐。 蔗糖：提供碳源和能源，同时能够维持细胞的渗透压。 甘氨酸、维生素等：满足离体植物细胞的特殊营养需求。 微生物培养基以有机营养为主； MS培养基以无机营养为主； 3、植物激素的浓度、使用顺序和用量比例 生长素细胞分裂素比值 结果 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化， 抑根形成 比值适中 促进愈伤组织形成 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素，后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 二、影响植物组织培养的因素 思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？ 5、温度、光照、PH等条件 pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h 6、无菌环境 试管苗移栽前的培养过程需要无菌环境 二、影响植物组织培养的因素 植物组织培养的过程 离体组织或细胞 试管苗 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 不需要光 需要光 (利于叶绿素的合成和进行光合作用) 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培养 移栽 栽培 三、菊花组织培养的具体过程 （一）制备MS固体培养基 1、配制各种母液 2、配制培养基 3、灭菌 ①熔化 ②加成分 ③定容 ④调节PH值 ⑤分装 培养基及器械用高压蒸汽灭菌法灭菌 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、表面消毒 ①流水冲洗 （20min左右） ②酒精处理 无菌吸水纸吸干水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2—3次，持续6－7s，后立即取出，在无菌水中清洗 ③氯化汞处理 无菌吸水纸吸干水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液 原因：①分裂旺盛、分化能力强(全能性高)；②未被细菌或病毒感染 （三）接种 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 整个过程要在酒精灯火焰旁进行，每次使用器械后，要用火焰灼烧灭菌并冷却，接种后立即盖好瓶盖。 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子。 用体积分数为70％的酒精喷雾进行空气消毒， 再擦拭工作台最后用紫外线照射30分钟。 3、材料的切取和接种 ②外植体在培养基中要分布均匀，以充分利用培养基中的营养成分、避免相互污染。 ①插入时应注意方向，不要倒插。接种完后立即重新封上封口膜。 （四）培养 最好在无菌箱中培养，并进行定期消毒。 培养条件：18-22℃， 每