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第五章 发酵工程 发酵已经从过去简单的生产酒精类饮料、生产醋酸和发酵面包发展到今天成为生物工程的一个极其重要的分支,成为一个包括了微生物学、化学工程、基因工程、细胞工程、机械工程和计算机软硬件工程的一个多学科工程。 现代发酵工程不但生产酒精类饮料、醋酸和面包,而且生产胰岛素、干扰素、生长激素、抗生素和疫苗等多种医疗保健药物,生产天然杀虫剂、细菌肥料和微生物除草剂等农用生产资料,在化学工业上生产氨基酸、香料、生物高分子、酶以及维生素和单细胞蛋白等。 发酵生产流程 发酵生产流程 History of applied microbiology Ancient times food preservation (vinegar, cheese) flavour (bread, soy sauce) brewing (beer, wine) 1861 Louis Pasteur first phase industrial biotechnology 1940 penicillin (Fleming) antibiotic industry production of fine chemicals History of applied microbiology 1973 rec DNA technology (Boyer Cohen) 1982 rec human insulin[胰岛素] post recombinant DNA area since 1982 rec therapeutic agents[治疗剂] 1990 rec bakers yeast 1992 rec chymosine [凝乳酶] (from yeast) 发酵(fermentation):狭义的发酵指利用微生物在有氧或无氧条件下的生命活动,来制备微生物菌体或其代谢产物的过程。广义的发酵指凡是利用培养细胞(动、植物和微生物细胞)来制得产品的过程。 发酵工程(fermentation engineering):研究发酵工业生产过程中,各个单元操作的工艺和设备的一门科学。 发酵工业用生产菌种的选育(自然选育、诱变育种、基因工程育种); 发酵条件的优化与控制; 生物反应器的设计; 发酵产物的分离、提取和精制。 1、采样时应尽可能保持相对无菌; 2、所采集的样本必须具有某种代表性; 3、采好的样必须完整地标上样本的种类及采集日期、地点以及采集地点的地理、生态参数等; 4、应充分考虑采样的季节性和时间因素,因为真正的原地菌群的出现可能是短暂的; 5、采好的样应及时处理,暂不能处理的也应贮存于4℃下,但贮存时间不宜过长。这是因为一旦采样结束,试样中的微生物群体就脱离了原来的生态环境,其内部生态环境就会发生变化,微生物群体之间就会出现消长。 森林、旱地,草地可先掘洞,由土壤下层向上层顺序采集; 水田等浸水土壤在不损土层结构的情况下插入圆筒采集。如果层次要求不严格,可取离地面5~25cm处的土。将采集到的土样盛入聚乙烯袋或玻璃瓶中。 在采集植物根际土样时,一般方法是自土壤中慢慢拔出植物根,在大量无菌水中浸渍约20min,洗去粘附在根上的土壤,然后再用无菌水漂洗下根部残留的土,这部分土为根际土样。 (1)根据土壤特点采样 ①有机质含量和通气状况 耕种地、菜园地:有机质多,通气好,适合细菌和放线菌生长; 森林地:植被厚,有机质丰富,但通气差,适合酵母菌和霉菌生长; 深度:5~25cm,酵母菌分布最浅,约为5~10cm。霉菌在浅土中。 ②pH值 偏碱土壤(pH7.0~7.5):细菌和放线菌 偏酸土壤(pH7.0):霉菌和酵母菌 ③地理条件 南方比北方分离的菌种多。南方采土5~25cm,北方采土10~30cm ④采样季节:秋季最理想 (2)根据微生物生理特点采样 ①根据微生物营养类型 微生物的营养需求和代谢类型与其生长环境有很大关系。如产纤维素酶的微生物多数在枯枝和木材地采样。 ②根据微生物的生理特性 在筛选一些具有特殊性质的微生物时,要根据该微生物独特的生理特性到相应的地点采样。如筛选高温酶产生菌时,通常要到温度较高的南方或温泉、火山附近采样。 在采集叶面时,一般是用灭菌的剪刀、打孔器、安全刀片等,由几片新鲜叶片的同一部位切取一小块,并注意不要损伤周围边缘。 选择叶面时应考虑叶位、叶龄、叶片正反面和在一片叶上的取样部位。 采集植物根及根系时,方法与根际土样采集方法相似。将洗净的根装入采样袋中,采集根系时,一般与根际土样一起保存。 用于细菌检测的水样应收集于100m1干净、灭菌的广口塑料瓶中。 由于表层水中含有泥沙,故在采样时应在较深的静水层中采集水样。 方法是:握住采样瓶底浸入水中30-50cm处,然后瓶口朝下打开瓶盖,让水样进入。如
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