木瓜蛋白酶精讲.pptVIP

木瓜蛋白酶的生产工艺和成本控制 * * 木瓜蛋白酶(Papain), 又称木瓜酶，广泛存在于番木瓜茎叶和果实中,以未成熟果实的乳汁中为最高。它既有很强的蛋白水解催化活性又含凝乳和溶菌活性,还具脂解能力及蛋白合成功能, 主要是催化蛋白质水解, 也能分解小肽。它的切割分解点很多, 大致优先分解精氨酶, 苯丙氨酸的肽键。又因其含量高、稳定性好、能有效地分解明胶、酪蛋白、谷蛋白、弹性蛋白、球蛋白和肌纤维蛋白等常用蛋白质，被广泛应用于肉类嫩化、啤酒澄清、明胶制造、蚕茧脱胶、皮革脱毛等工业，另外还在医学方面主要用于治疗消化不良、各种炎症和水肿，防止腹膜粘连，处理血检及创伤脱痂；此外，它还可以用于研究蛋白质结构等等。 在番木瓜的茎、叶中含有木瓜蛋白酶,但在实际生产中,主要是从未成熟的生番木瓜果实中收集果皮创口流出的白色浆液,经过加工提纯后得到。 提取与纯化途径： 1.主要流程： 番木瓜 (采集浆液)→浆液(过滤)→滤液(单宁法去杂质干燥)→ 粗酶制品(加半胱氨酸混合研磨)→研磨混合液(调PH后过滤)→滤液(硫酸铵和氯化钠两次盐析) →盐析物(低温半胱氨酸溶液中结晶)→结晶体(重结晶) →精酶 生产工艺 1、原料采集 番木瓜浆液的采集：番木瓜果实的浆液中富含木瓜蛋白酶,但是在果实完全成熟时,白色浆液就会逐渐减少。因此,采集浆液时应选择绿色的未成熟果。 其采浆方法是：用薄不锈钢刀片沿番木瓜果实的纵线将果皮割破,深度为2-3mm，根据果实大小，每个果实可以割5-10条刀口。然后用毛笔蘸取浆液抗凝保护剂涂刷在每一条刀口上，防止由于浆液凝固而影响浆液的采集。 最后,在果实外面套上一个比果实稍大的塑料袋，并将其固定在果柄处,用于收集流出的浆液。番木瓜开始采浆液后,就可以每隔5-8天,在没有刀口的部位破皮采集浆液,直到番木瓜果皮开始变黄为止。 2、番木瓜浆液的加工： 采集的番木瓜浆液要及时加工，一般不要超过24小时。将木瓜乳汁倾入不锈钢锅中，在搅拌的条件下加入含0.1％四乙酸乙二胺化二钠和0.3％氯化钠溶液，并加入还原剂0.06mmol／L硫代硫酸钠和0.08mmol／L半胱氨酸的混合液，混匀后过滤，收集滤液。再将浆液装入搪瓷浅盘中，浆液的深度在8-12mm为好。最后，将搪瓷浅盘装入鼓风式热风干燥箱中，在55-60℃的条件下对浆液进行热风干燥（如果条件允许，最好是采用低温真空干燥法或喷雾干燥法进行干燥）。当浆液的含水量下降至5-8%时，即可从搪瓷浅盘中取出片状的木瓜蛋白酶，再经过粉碎,即可得到木瓜蛋白酶粗品。 木瓜蛋白酶粗制工艺流程 木瓜蛋白酶的精制 首先将粉碎好的木瓜蛋白酶粗品与0.04M的半胱氨酸溶液混合后进行研磨，然后将混合液的pH值调节到9.0，过滤除去不溶物。再分别用硫酸铵[(NH4)2SO4]和氯化钠(NaCl)进行两次盐析。最后在2-4℃的低温条件下，让木瓜蛋白酶在pH值为6.5的0.02M半胱氨酸溶液中结晶。将以上收集的晶体洗涤干燥得到精品。 精制工艺流程图