DGGE中DNA的纯化.pptxVIP

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2017-05-07 发布于河南
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DGGE中DNA的纯化.pptx

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DGGE中DNA的纯化

DNA回收纯化;B.从琼脂糖凝胶回收纯化DNA 用琼脂糖凝胶分离PCR片段，用UV观察EB染色条带；用干净的刀片切出所需DNA条带，注意要在长波长（≥300nm）UV灯下操作，并快速操作，以免损伤DNA。应尽可能多地去除琼脂糖凝胶，一次操作可切取多至300mg的条带；将300μl (300mg) 琼脂糖条带转移至1.5ml离心管。直接在65℃温育直至凝胶全部溶化（一般可按公司提供的说明书进行）；加等体积的溶液BE；下接C步骤。;C.纯化步骤将PCR产物转移至一个1.5ml的离心管，向其中加入等体积溶液BD，混合均匀。将步骤1所获溶液置于DNA纯化柱中，静置2min。 12000rpm离心1min，弃滤液。此时DNA片段被吸附于DNA纯化柱中的硅胶膜上加入500μl溶液PE。12000rpm，离心1min，弃滤液。洗脱硅胶上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱，以获取高质量的DNA片段加入500μl溶液PE。12000rpm，离心1min，弃滤液。 12000rpm离心3min，以彻底去除纯化柱中的液体。去除残留乙醇，避免乙醇影响后续酶促反应，同时也有利于DNA的充分溶解将离心柱置于新的1.5ml离心管。向纯化柱的中央处，悬空滴加15μl溶Ｅluent(60℃预热)，静置２min．12000rpm离心1min，管底即为目的DNA片段。贮存于-20℃备用。;谢谢！