培养基及其设计、制备、优化精讲.pptVIP

喷嘴式连消塔 套管式连消塔 4 影响培养基灭菌的其他因素 实际灭菌中，除了杂菌的种类，数量，灭菌的温度和时间外，培养基的成分，pH值，培养基中颗粒与泡沫等对培养基灭菌也有影响。 4.1 pH值 培养基中氢离子浓度直接影响灭菌的效果。培养基的酸度越大，所需杀灭微生物的温度越低，时间越短， pH值6-8时微生物最耐热。 4.2 培养基成分 油脂，糖类及一定浓度的蛋白质可增加微生物的耐热性，另一些物质，如高浓度的盐类，色素等可削弱其耐热性。 4.3 泡沫：灭菌应避免产生泡沫，因为泡沫能形成隔层，使热量难以传递，不易达到微生物致死温度。 4.4 培养基的物理状态：牛顿型培养基（细菌、酵母），非牛顿型培养基（放线菌、霉菌） 固体培养基比液体培养基灭菌时间长，液体的传热效率高。 4.5 微生物细胞中水含量：在一定范围内，微生物细胞含水量越多，则蛋白质的凝固温度越低。 4.6 微生物的菌龄：年老细胞对不良环境的抵抗力比年轻细胞强，这与细胞中蛋白质的含水量有关，年老细胞中水份含量低。 4.7 微生物的耐热性：细菌的营养体、酵母、霉菌的菌丝体对热较为敏感，而放线菌、霉菌孢子比营养细胞的抗热性强，细菌的芽孢抗热性更强。 4.8 培养基中微生物的数量 4.9 空气的排除 4.10 搅拌 第三讲（2011.9.21） 第四章 培养基及其设计、制备、优化 第一节 培养基的类型 第二节 发酵培养基的成分及来源 第三节 发酵培养基的设计和优化 5、生长因子、前体和产物促进剂 从广义上讲，凡是微生物生长不可缺少而细胞自身不能合成的微量的有机物质，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等均称生长因子。 5.1生长因子 如以糖质原料为碳源的谷氨酸生产菌均为生物素缺陷型，以生物素为生长因子,生长因子对发酵的调控起到重要的作用 。 有机氮源是这些生长因子的重要来源，多数有机氮源含有较多的B簇维生素和微量元素及一些微生物生长不可缺少的生长因子 。 前体指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接彼微生物在生物合成过程中合成到产物物分子中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。如：青霉素G生产添加苯乙酸，红霉素生产添加丙酸丙醇等，合成L-丝氨酸添加甘氨酸。 5.2前体 青霉素：分子量356 苯乙酸:分子量136 用法：前体使用时普遍采用流加的方法（采取少量多次） 前体一般都有毒性，浓度过大对菌体的生长不利 苯乙酸，一般基础料中仅仅添加0.07% 前体相对价格较高，添加过多，容易引起挥发和氧化， 流加也有利于提高前提的转化率。 5.3产物促进剂 所谓产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。 促进剂提高产量的机制还不完全清楚，其原因是多方面的。 有些促进剂本身是酶的诱导物， 有些促进剂是表面活性剂，可改善细胞的透性，改善 细胞与氧的接触从而促进酶的分泌与生产， 也有人认为表面活性剂对酶的表面失活有保护作用； 有些促进剂的作用是沉淀或螯合有害的重金属离子。 6、水 对于发酵工厂来说，恒定的水源是至关重要的，因为在不同水源中存在的各种因素对微生物发酵代谢影响甚大。 水源质量的主要考虑参数包括pH值、溶解氧、可溶性固体、污染程度以及矿物质组成和含量。 对于酿造行业，水的重要性不言而喻 对于常规发酵，可靠、持久，能提供大量成分一致清洁的水。 第三节 发酵培养基的设计和优化 参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备，按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基。 1、培养基成分选择（设计）的原则 1.1 根据微生物的营养需求配制培养基 1.2 注意培养基营养物质的浓度和配比 如蔗糖适当浓度是营养，高浓度则成为抑制因子。 注意培养基的C/N对发酵的影响。如谷氨酸的发酵， C/N为4：1时，菌体大量繁殖，酸积累少，当C/N为3：1时产生大量的谷氨酸。 1.3 调节适当的物理化学条件 1.3.1 pH：发酵过程的酸碱度会发生变化，一般可考虑 加入缓冲剂，如：KH2PO4 K2HPO4 1.3.2 渗透压和水分活度（Aw）：等渗溶液适宜微生物的生长。Aw表示微生物在天然环境中可实际利用的自由水或游离水的含量。 Aw=P/P0，即某溶液的蒸汽压（P）与纯水的蒸汽压（P0）的比值。各种微生物的生长范围Aw：0.998~0.6，设计培养基时应考虑到Aw, G