第9章4-化学键合相色法-离子交换键合相.ppt

第九章－4化学键合相色谱离子交换键合相色谱ion exchange chromatography，IEC 1、早期离子交换色谱 固定相：高分子聚合物（如聚苯乙烯树脂）为基质的离子交换树脂 缺点：由于溶胀性，不耐高压，以及表面的微孔型结构影响传质速率。 2、离子交换键合相色谱 定义：在化学键合的有机硅烷分子中带上固定的离子交换基团，便成了离子交换键合相。 离子交换键合相色谱 基质：薄壳型或全多孔微粒硅胶 优点：具有较高的耐压性； 化学及热稳定性； 由于有较好的机械强度，耐压； 可以高压匀浆装柱。 缺点：pH适用范围只能在pH 2-8。 pH＞9时，硅胶便容易溶解。 未键合的残留硅羟基易生成硅酸盐。 阴离子交换剂 3、离子交换容量 交换容量是指单位质量的离子交换剂所能与其它离子发生交换的量。 交换容量越大，负载能力越大，ｋ＇值也越大。 离子交换键合相的交换容量与固定相的表面积直接有关。 4、分离机理 1）阳离子交换 4、分离机理 1）阳离子交换 4、分离机理 2）阴离子交换 5、流动相 成分：多为控制一定的pH的缓冲液、有机成分作为改性剂。 溶质的保留机理：兼有离子交换和吸附双重机理。 溶质的保留值影响因素：流动相的pH值、离子强度以及有机改性剂。 1）pH值对保留时间的影响 保留规律 阴离子交换剂分离有机酸 在用强阴离子交换键合相分离酸性药物时，pH↑→药物解离度↑→ｋ’↑，保留时间↑。 pH越小，酸的解离被抑制，保留越小 pH越大，酸的解离程度增大，保留增强 阴离子交换剂分离有机酸 在用强阴离子交换键合相分离酸性药物时，pka值越小，保留时间↑。 例：离子交换色谱法分析核苷酸 保留规律 阳离子交换剂分离有机碱 在用强阳离子交换键合相分离碱性药物时，pH↑→游离碱↑→ｋ’↓，保留时间↓。 pH高，碱以分子形式存在，保留值很小 pH低，碱以质子化形式存在，保留值较大 例：离子交换色谱法分析核苷酸 流动相：含Ph3.0的磷酸二氢钾-乙腈溶液（70：30） 色谱柱：agilent zorbax 300-SCX（250mm×4.6mm, 5?m ） * 中国药科大学药物分析教研室 * 中国药科大学色谱分析课程 中国药科大学药物分析教研室 * 阳离子交换剂： 磺酸基(-SO3H)、羧酸基(-COOH) 阴离子交换剂： 季氨基(-R4N+)、氨基(-NH2) ５μm ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 全多孔微粒型固定相： 测定方法：酸碱滴定法 优点：传质快，渗透性好 缺点：表面积较小，样品容量小（0.1mg/g） 优点：表面积大，样品容量大（mg/g） 薄壳型(表面多孔层)： BH：样品离子 M：流动相离子 R：固定相带负电荷的交换基团 BH：样品离子 M：流动相离子 R：固定相带负电荷的交换基团 A：样品离子 N：流动相离子 R：固定相带正电荷的交换基团 流动相的pH选择应适中，最好选择在被分离的酸或碱的pka或pkb附近，使它们解离适中，达到最佳分离。 弱酸及弱碱的保留值与洗脱液的pH值有关 先解离并参加离子交换而被分离 不解离，不参加离子交换，而以分子形式几乎无保留地通过柱子 Tips AMP:一磷酸腺苷 ADP:二磷酸腺苷 ATP:三磷酸腺苷二钠 流动相：含5 %甲酸的10 %甲醇水溶液（A相）－含1 %甲酸的10 %甲醇水溶液（B相）0min100％B→3min100％A 色谱柱：Alltech Allsep Anion column（100mm×4.6mm, 7?m ） * 中国药科大学药物分析教研室 *