酪蛋白实验一.docVIP

实验基本要求 向同学们解释和说明生化实验的整体安排构思。 明确向学生提出通过生化实验后，必须达到什么目的。 双语教学的目的和要求。 实验安排： 实验一 酪蛋白的粗提取 实验二 凝胶层析（sephadex G-75）分离纯化酪蛋白 实验三 酪蛋白含量测定 实验四 SDS测定酪蛋白分子量 实验五 核酸的提取 实验六 谷丙转氨酶活性的测定 实验七 蔗糖酶米氏常数的测定 实验八 演示实验-碱法小提质粒 实验九 演示实验-琼脂糖凝胶电泳 5.实验要求： ①准时进行实验，不得迟到、早退。 ②实验前5分钟对照实验柜门器材列表检查核对有无缺损，如有按照要求登记，并在实验前到511补齐，否则视为损坏，依价赔偿。 ③课代表实验前10分钟到达教室帮同学们打开柜门、电阀。通知学生实验的安全设施地点（水冲洗，灭火器具等） ④实验时必须穿着实验服，保持安静，关闭手机，不得做与实验无关事情。 ⑤按学号每两人一组，对面两组同学共用一套试剂，不得取用别组试剂，避免试剂交叉污染。 ⑥实验结束后上交实验数据，核对实验用品，整理台面。课代表安排4-6名值日生，试剂归位，打扫卫生，关电阀和门窗。 ⑦实验报告的格式：实验目的、实验原理、实验结果与分析讨论。报告以英文书写为主。 实验一 酪蛋白的粗提取 一、目的要求 1.学习和掌握盐析法从牛奶中提取酪蛋白的原理和方法。 2.学习掌握离心机的使用，了解离心法在生化中的应用原理。 二、实验原理 牛奶中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质。酪蛋白沉淀后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力强、分散性高，在奶中呈高分子状态。 （一）酪蛋白（casein），又称干酪素、酪素、酪朊，乳酪素。 1.来源：通常是指由牛乳腺分泌的多种(约20种)磷蛋白(phosphoproteins)的混合物。存在于牛奶或干酪(cheese)中，在鲜牛奶中含量约3％(人乳中约0.9％)，是牛乳蛋白重要组分，占总蛋白80％以上。 2.分类：可通过电泳予以区别，主要有α-酪蛋白(占75％)、β-(占22％)、γ-(占3％)和к-酪蛋白。α-酪蛋白（分子量约为23.6 kDa，用电泳法分离可分出αs1-、αs2-、和αs3-三种变异型）、β-酪蛋白（分子量约为24.0 kDa，至今发现有七个变异型，即A1、A2、A3、B、C、D、E。）和к-酪蛋白（分子量约为19.0-20.0 kDa，有两种变异型，即A和B）。 α-酪蛋白通常是指由牛乳腺分泌的磷蛋白(phosphoprotein)之一，是酪蛋白在电泳图谱上迁移最快，含量(占酪蛋总量的75％)最多的一种磷蛋白。可从市售酪蛋白经电泳分离或利用不同溶解条件或与盐(如Ca2+)结合力上差异获得分离。分子量约23 600。主要用于生化试剂，如作为血纤蛋白溶酶(plasmin)测定的底物。3.密度：1.25～1.31 4.性状：纯酪蛋白为白色至浅黄色颗粒或粉状，无臭无味。 5.溶解情况：微溶于水及有机溶剂，溶于碱性溶液及浓酸。 6.用途：食品增稠剂，营养强化剂、乳化剂和稳定剂。用于冰淇淋、饼干、面包、花味油膏、蛋黄酱、火腿、腊肠等。还用作木材胶料、纸张涂料、糖尿病人食品、生物用料、纺织浆料、水溶性涂料的基料、塑料钮扣的原料、粘合剂原料、医药及生化试剂等。 （二）蛋白质 1.简介：蛋白质是化学结构复杂的一类有机化合物，是人体的必须营养素。蛋白质的英文是protein，源于希腊文的proteios，是“头等重要”意思，表明蛋白质是生命活动中头等重要物质。蛋白质是细胞组分中含量最为丰富、功能最多的高分子物质，在生命活动过程中起着各种生命功能执行者的作用，几乎没有一种生命活动能离开蛋白质，多以没有蛋白质就没有生命。 2.发现历史：人们对蛋白质重要性的认识经历了一个漫长的历程。1742年Beccari将面粉团不断用水洗去淀粉，分离出麦麸，实际上就是谷蛋白之一。1841年Liebig发表了分析蛋白质的文章。此后于1883年John Kjedahl发明了一个准确测定氮进而测定蛋白质含量的分析方法，至今仍被广为应用。随后，氨基酸也被发现。1902年E.Fischer测定了氨基酸的化学结构，还测定了肽键的性质。大约在1927年，J.B.Summer证明了酶是一种蛋白质。然后，上世纪50年代，J.B.Summermi描述胰岛素的氨基酸顺序时获得了一个重大发现。其他研究表明DNA、RNA和蛋白质之间的相互关系。1953年F.Crick和J.Watson描述了DNA的分子结构。科学家们逐渐阐明了细胞如何建造具有特定氨基酸顺