分子生物学技术原理应用复习概述.docx

分子生物学技术原理及应用 分子生物学：通过研究生物大分子（核酸、蛋白质）的结构、功能和生物合成等方面来阐明各种生命现象的的本质。 *系统生物学：研究生物系统组成成分的构成与相互关系的结构、动态与发生，以系统论和实验、计算方法整合研究为特征的生物学。 *基因组学：是研究生物基因组的组成，组内各基因的精确结构、相互关系及表达调控的科学。 *蛋白质组学：指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律。 *示踪分子：用于标记DNA或者蛋白质的，使之可遗传并被检测出得物质，有放射性和非放射性 *绿色荧光蛋白（GFP）：这种蛋白质最早是在水母中发现，分子质量为26kDa，由238个氨基酸构成，第65～67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成发光团，是主要发光的位置。在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色荧光，是常用的报道基因。 *限制性内切酶：是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列（一般具有双重对称的回文结构），并以内切的方式水解双链DNA的核酸水解酶。 PCR：聚合酶链式反应利用DNA聚合酶体外扩增核酸片段的方法。 *荧光定量PCR（real time PCR）:在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。 DNA文库：DNA 或DNA的所有片断随机地连接到基因载体上,然后转移到适当的宿主细胞中,通过细胞增殖而构成各个片段的无性繁殖系(克隆),在制备的克隆数目多到可以把某种生物的全部DNA都包含在内的情况下,这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。 *cDNA文库：以mRNA为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。 内切酶: 内切酶，即限制性核酸内切酶。亦称限制性核酸酶。是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸顺序,并以内切方式水解双链DNA的核酸水解酶。它们不同于一般的脱氧核糖核酸酶（DNase）,它们的切点大多很严格，要求专一的核苷酸顺序 ——识别顺序。 TAq酶：是一种耐热的DNA聚合酶，可以耐受90C以上的高温而不失活，常见于PCR技术，用于大量扩增DNA片段。 *Southern-blot: 是一种常用的 DNA 定量的分子生物学方法。其原理是将待测的 DNA 样品固定在固相载体（硝酸纤维膜或尼龙膜）上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号，通过检测信号的有无、强弱可以对样品定性、定量，从而计算出转入的拷贝数 *Northern-blot: 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。原理类似southern-blot。 *Western-blot：也称为免疫印迹，是一种分析和鉴定特定蛋白质的技术，用来检测在不均一的蛋白质样品中是否存在目标蛋白的一种方法。即将混杂的总蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，转移至固相膜(如硝酸纤维素膜、尼龙膜和PVDF膜等)上，再用特定蛋白质抗体进行免疫反应，显色后，可显示出该特定蛋白是否存在及其表达量。 *探针：是一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500bp）， 用于检测与其 HYPERLINK /view/226438.htm \t _blank 互补的 HYPERLINK /view/28220.htm \t _blank 核酸序列。双链DNA加热 HYPERLINK /view/194271.htm \t _blank 变性成为单链，随后用 HYPERLINK /view/357582.htm \t _blank 放射性同位素（通常用磷-32）、荧光染料或者 HYPERLINK /view/1326.htm \t _blank 酶（如 HYPERLINK /view/557024.htm \t _blank 辣根过氧化物酶）标记成为探针。 *离子交换色谱：以离子交换树脂作固定相，在流动相带着试样通过离子交换树脂时，由于不同的离子与固定相具有不同的亲合力而获得分离的色谱法。 *气相色谱（GC）：GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离。用于可挥发、热稳定、沸点不超过500℃的化合物。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，也叫流动相）带入色谱柱，柱内含有液体或固体固定相，由于