黑色素瘤相关抗原MAGeA9对p53转录活性和稳定性影响的实验研究.pdf

中文摘要 实验研究 摘 要 目的： 野生型p53在监控细胞基因组DNA的完整性上发挥着“基因组卫士” 的作用。正常情况下，细胞内p53蛋白的表达水平很低。细胞DNA受到 损伤时，p53转录被激活并诱导其下游靶基因表达，从而发挥调控细胞周 期、促凋亡的生物学作用。最近的研究表明，黑色素瘤相关抗原MAGE．A 转录活性，并可与MDM2结合，促进p53泛素化和降解，从而阻碍了肿 发生发展中可能的信号通路及作用机制。 方法： 1利用基因转染、RT-PCR、WestemBlot、荧光素酶报告基因分析等 方法检测外源性MAGE．A9对p53靶基因p21啪1表达的影响。 l 细胞的增殖活性。 3利用基因转染、RT-PCR、Western 的影响。 4采用放线菌酮蛋白合成抑制实验，分析不同转染组MDA．MB一231 细胞中p53蛋白在放线菌酮作用不同时间后的表达情况。 结果： 1 RT-PCR分析结果显示，与转染空载体组相比，转染p53基因可以 使MDA．MB．231细胞中p21懈1 mRNA表达水平均明显低于 转染p53基因和MAGE．A9基因后，p21黼1 MDA．MB．23 异(PO．05)。 中文摘要 2Western 1细胞 Blot分析结果显示，转染p53基因后，MDA．MB．23 蛋白的表达水平明显降低(尸O．05)。 1细胞的荧 3荧光素酶报告基因分析结果显示，对照组MDA．MB．23 光素酶活性为1．oo+o．00；在单独转染25ng 1细 p53质粒组MDA．MB．23 显升高，差异具有统计学意义(PO．05)；共转染25ngp53质粒和逐渐 1细胞 中p21 O．05)。 4克隆形成实验结果显示，在MDA．MB．231细胞系中，转染空载体 抗性的细胞克隆数为53．25±6．08，与空载体对照组相比显著降低(尸 1细胞，G418 O．05)；共同转染p53质粒和MAGE．A9质粒组MDA．MB一23 5MTT法分析结果显示，转染基因后的MDA．MB．231细胞接种96 1细胞的相 组(尸O．05)。 载体组、单独转染0．599p53质粒组、共同转染O．599p53和0．599 MAGE．A9质粒组 MAGE．A9质粒组、共同转染O．599p53和1．0pg 2 中文摘要 统计学意义(P0．05)。 空载体组、单独转染0．5lagp53质粒组、共同转染0．599p53和O．599 MAGE-A9质粒组 MAGE—A9质粒组‘、共同转染0．599p53和1．099 计学意义(尸O．05)。 8放线菌酮蛋白合成抑制实验结果显示，单独转染p53质粒组，