益气解毒法对大鼠干细胞系WB-F344作用机制研究.pdfVIP

养24h后，分别加入浓度为5％、10％、20％的成分组与水煎组药物血清， 空白对照组加入相同浓度梯度的正常大鼠血清，正常对照组则加入等量的 培养液，正常培养基培养。各组血清作用24h后，采用四甲基偶氮唑盐(MTT) 比色法测定细胞的增殖状况，选取增殖的最佳药物血清浓度，后续实验均 以此浓度进行研究。 4．益气解毒法对wB—F344 zR 表达的影响：血清分为正常对照组(10％胎牛血清)、空白对照组(10％正常大 鼠血清)、成分组(10％成分剂血清)、水煎组(10％水煎剂血清)，各组血清 作用细胞24h后，裂解细胞，提取细胞的总蛋白，蛋白印迹法 (Wes lR和 TGF-D：R的表达情况。 5．益气解毒法对WB-F344 地塞米松1Ilmol／L)，加入10％成分组和水煎组的含药血清，并设立正常 和空白血清对照孔，前者加入正常培养液，后者加入1o％正常大鼠血清。 志物白蛋白(ALB)的mRNA表达量，实验过程中注意观察含药血清刺激后细 胞形态的变化。 于培养板，37。C、6小时静置，待细胞贴壁后加入浓度为40ng／mL的转化 因子D，再分别加入各组血清干预，血清仍分为正常对照组(10％胎牛血 清)、空白对照组(10％正常大鼠血清)、成分组(10％成分剂血清)、水煎组 (IO％水煎剂血清)，待作用细胞24h后，knnexinv-FITC和PI染色，流式 细胞仪测定并分析数据。 结果 II 清成分组和水煎组均能促进WB-F344细胞的增殖，与空白、正常对照组比 药血清均未表现出对细胞的毒性作用，镜下观察各组细胞生长良好。 2．益气解毒法对WB-F344 表达的影响：经10％牛黄参含药血清成分组和水煎组干预后，WB-F344细胞 3．益气解毒法对WB-F344 参含药血清成分组和水煎组干预后，WB-F344肝干细胞表面标志物AFP mRNA的表达量在细胞分化过程中随着时间的延长逐渐减少，肝细胞表面 标志物ALB (PO．05)。 4．益气解毒法对WB-F344凋亡的影响：经10％牛黄参含药血清成分组 和水煎组干预后，WB-F344细胞的凋亡率与空白、正常对照组相比显著下 降(P0．01)，且成分组优于水煎组(P0．05)。 ’‘·．- 结论 1．益气解毒法可以促进肝干细胞WB-F344的增殖，对细胞未表现出明， 显的毒性作用。 TGF-p。R和TGF-p：R的表达量上调。 3．益气解毒法可以通过细胞因子体系诱导肝干细胞WB-F344向肝细 胞特异性方向的分化。 4．益气解毒法具有拮抗肝干细胞WB-F344凋亡的作用。 5．益气解毒法所选中药复方随剂型的不同，疗效亦有一定的差异，本 实验中成分剂牛黄参胶囊较牛黄参水煎剂效果更好。 关键词 益气解毒法；肝干细胞；WB-F344；调控机理 III Abstract ResearchonActi onMechani smoftheMethodof Toni i 0i and fyng catonon Detoxi i Rat i cStemCeIILi neWB-F344 Hepat i aI i I i ni caI Basi S ofChi neseMedi Ci ne Specty：C Authm‘：Chen Li—feng Tutor：ProfessorZhao Yi i an ng—q