干扰素α对肝癌生长与肺转移影响的实验研究.pdfVIP

第一部分 长期应用干扰素仪对肝癌的生长和侵袭转移的影响 本部分应用我所建立的高转移潜能人肝癌原位移植裸鼠模型HCCLM3模拟临床 治疗模式，采用形态学观察方法观察长期IFNa治疗(持续12w)对肝癌生长和 疫组化(IHC)分析以及验证IFN0【治疗过程中主要时间点对肝癌血管生成因子，肿 瘤缺氧的影响；应用体外细胞学实验如肿瘤细胞的增殖，迁移以及侵袭试验等方 法来研究IFNot对肝癌细胞侵袭转移的直接影响；运用流式细胞学技术检测外周 血稳定转染红色荧光蛋I兰t(RFP)的循环肝癌细胞。 1．IFNa能够显著抑制肝癌生长，提高总体生存。 12w的IFNot治疗能够显著抑制肝癌生长，IFNa治疗第2w起，治疗组和对照组 mm3 (给予生理盐水，NS)的肿瘤大小开始有显著性差异，分别为1231．13+212．37 vs．2544．594-369．48 mm3(P=-0．0216)，而且这种差异持续存在，提示长期使用口附0【 治疗不会发生治疗失败的现象。长期吲a能够显著改善裸鼠总体生存，持续 rank,P--O．0067)，在整个疗程，IFNa治疗并未引起任何显著的体重减轻。 2．IFNa主要通过抑制血管生成作用抑制肝癌生长 为进一步研究长期IFNa治疗延缓肝癌生长的机制，我们设计了第二阶段裸鼠动 物实验，设立治疗组和对照组，每组6只，设立4个观察时间点，治疗时间开始 于建立模型后1w，分别为治疗1w,3w,4w,6w。研究提示肝癌生长变化和肿瘤组 瘤血管生成还是肝癌生长的重要基础。通过PCRarray检测，和同期的对照组相 被大大下调，治疗组和对照组的CD31密度分别为5．3oA4-0．6％vs．10．2％士0．4％ (．P=0．0022)，提示此时IFNa能够显著下调肝癌的血管生成。此外，体外实验证 实，IFNoL在100U／ml有明显的抑制HUVEC增殖的影响。表明，IFNtl能够直接 2 或间接抑制血管内皮细胞，可能和减少肿瘤细胞生长的血管生成因子有关。 3．长疗程IFNa治疗可加重肿瘤缺氧，上调侵袭转移相关因子 IFN(I治疗5w后，肿瘤缺氧程度较对照组开始加重，至第7w时显著加重；应用 PCR芯片验证，与相同时间点对照组比较，从肿瘤生长第5w开始，IFNa治疗组 的部分血管生成因子RNA水平开始上调；至第7w时，多数因子显著上调，包 及Westem blotting进一步证实了上述因子的组织和蛋白水平变化。推测这些侵 袭转移因子的上调可能和治疗诱导肿瘤缺氧环境有关。 5．IFNa对肝癌细胞本身无明显直接作用 体外酬a治疗(即对HCCLM3细胞的直接作用)是否能够直接影响肿瘤细胞侵 袭转移的能力，以及上调上述侵袭转移相关因子；体外增殖实验结果表明，多种 浓度的IFNa无法抑制LM3细胞增殖；划痕实验提示多种浓度的删伐未能抑制 体外作用并不上调各种侵袭转移相关因子；因此提示IFNa体外对LM3细胞的直 接作用并不能影响肝癌细胞的侵袭转移能力，而体内治疗过程中，肿瘤环境的改 变如肿瘤缺氧可能是肿瘤侵袭转移能力改变的主要原因。 6．IFNa治疗相对增加外周血循环肿瘤细胞． 进一步评估IFNa所诱导的肿瘤缺氧以及上调的转移相关因子是否引起原发瘤侵 袭性的改变，通过流式细胞仪检测两组外周血中的循环肿瘤细胞(RFP．LM3， CTC)，两组没有显著性差异(O．075％4-0．020％vs．0．063％4-O．018％，P=0．574)， 但通过肿瘤大小标化后，发现治疗组的CTC有高于对照组的趋势(0．068％4- 0．022％vS．0．01 肝癌细胞出血管的过程，增加了原发瘤的侵袭转移能力。进一步研究发现，在治 疗6w时，两组肿瘤的增殖水平(飚．67)无显著性差异，治疗组和对照组分别为 原发瘤增殖的影响无关。 3 第二部分 IFNu治疗抑制肝癌肺转移的相关机制 前一部分研究发现IFN(t治疗能够抑制肝癌生长，但增加了肝癌细胞的侵袭性： 而肺转移作为肝癌侵袭转移的重要特性，提示我们需要进一步评估IFNa治疗对 肝癌肺转移的影响，虽然ⅢNcc治疗相对增加了