生物质谱课程方案.ppt

生物分析技术 ;第一节 概述 第二节 质谱仪 第三节 生物质谱的应用; 质谱分析法(Mass Spectroscope,MS)是将化合物形成离子或碎片离子，按质荷比(m/z)的不同进行测定，从而进行成分分析和结构分析的一种方法。根据质谱分析法的结果（质谱图）所提供的信息可以进行有机物、无机物的定性和定量分析，生物大分子的结构分析，同位素的测定及固体表面的结构和组成分析。 生物质谱就是用于生物分子分析的质谱技术。由于生物分子大多数以其高相对分子质量区别于分子质量在几十到几千的无机或有机小分子，因而，生物质谱要求测定上万甚至几十万的分子质量。; 早期，质谱分析法仅限于小分子和中等分子的研究，因为要将质谱应用于生物大分子需要将其制备成气相带电分子，然后在真空中物理分解成离子。如何使蛋白分子经受住离子化过程而又不丧失其结构形态是个难题。20世纪70年代，解吸技术的出现成功地将蛋白分子转化成气相离子，而后快原子轰击与其紧密相关的溶液基质使得具有极性、热不稳定的蛋白分子可经受住电离过程。但这些方法仅限于10kD以下蛋白分子的研究。80年代电喷雾电离(ESI)和基质辅助激光解吸电离(MAILDI) 技术的发展则使得质谱方法成功应用于高分子量蛋白分子的研究。; 1906年 J.JThomson在实验中发现带电荷离子在 电磁场中的运动轨迹与它的质荷比有关 并于1912年制造出第一台质谱仪 1946年 飞行时间质量分析器 1953年 四极杆质量分析器 1959年 质谱仪首次用于多肽测序 1965年 离子共振质谱 1968年 电喷雾离子源 1974年 傅里叶变换离子回旋共振分析器 1987年 基质辅助激光解吸电离质谱;日本科学家田中耕一(Koichi Tanaka)1959年出生于日本富山县首府富山市，1983年获日本东北大学学士学位，现任职于京都市岛津制作所，为该公司研发工程师，分析测量事业部生命科学商务中心、生命科学研究所主任。他对化学的贡献类似于约翰·芬恩，因此也得到了1／4的奖金。;第二节 质谱仪;离子源; zU=(1/2)m?2 m/z=2U/ ?2;质谱仪的分类;二、质谱仪的基本结构;质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在高真空状态下工作，一般应在10-5～10-6Pa。 (1)真空度差，过多的氧气将损耗或烧毁离子源的灯丝； (2)高本低气压将干扰质谱图; (3)电离空气压过高，会发生离子-分子反应，改变碎片谱图； (4)离子源内的高气压将干扰电子束的调节； (5)电离气或离子源内的高气压，可能引起高达数千伏的离子加速电压放电。;一般质谱仪由机械真空泵(低真空泵)，扩散泵或分子泵(高真空泵)组成真空机组，使离子源和分析器部分的达到真空。 只有在足够高的真空下，离子才能从离子源到达接收器，真空度不够则灵敏度低。;2. 进样系统;(1)间歇式进样系统;(2)直接探针进样; 对于在间歇式进样系统的条件下无法变成气体的固体、热敏性固体及非挥发性液体试样，可直接引入到离子源。 这种进样方式不必使样品充满整个储存器，因此，可适用样品量较小和蒸汽压较低的物质。直接进样法扩大了质谱法的应用范围。;(3)毛细管进样;液相色谱-质谱联用仪 采用离子喷雾及电喷雾技术除去流动相使样品离子进入质谱分析仪。; 质谱仪中产生离子的装置称为离子源，其功能是将进样系统引入的气态样品分子转化成离子。 不同的分子离子化所需要的能量不同，因此，应选择不同的离解方式： 硬电离：能给予样品较大能量的电离方法。 软电离：给予较小能量的电离方法，适用于易 破裂或易电离的样品。 ;(1)电子轰击电离源 (Electron Impact Ionization, 简称 EI):样品需经过汽化进入电离区，用约70eV能量的电子束与气化的试样分子相互作用，使分子中电离电位较低的价电子或非键电子电离，为硬电离方法。1980年以 前的主要离子化方式， 只能用于有机小分子 (400Da以下)的电离。 ;电子轰击电离的优缺点;质谱技术中的离子源;质谱技术中的离子源;快原子轰击技术优点： 分子离子和准分子离子峰强； 碎片离子峰丰富； 灵敏度高，适用于热不稳定、极性强的分子，如肽类、蛋白质、多糖、金