第十八章高效液相色谱法研讨.pptVIP

第十八章 高效液相色谱法high performance liquid chromatography；HPLC;高效液相色谱法基础;经典液相色谱法为基础， 引入气相色谱法的理论和实验技术， 高压输送流动相， 高效固定相及高灵敏度检测器， 现代液相色谱分析方法。;与经典液相色谱法相比 ;与气相色谱法相比;;其他色谱类型 亲合色谱法（affinity chromatography；AC） 手性色谱法（chiral chromatography；CC） 胶束色谱法（micellar chromatography；MC） 电色谱法（electrochromatography；EC） 最常用：化学键合相色谱法 ;（3）HPLC的固定相;2.化学键合相色谱法 ;a.化学键合相的种类;;b.化学键合相的性质;含碳量和覆盖度;;1.使用硅胶基质的化学键合相时流动相中水相的pH应维持在2-8，否则会引起硅胶溶解，但硅-碳杂化硅胶等为基质的键合相可用于很宽的pH范围（如pH2-12） 2.不同厂家，不同批号的同一类型键合相也可能表现不同的色谱特性 ;c.其他种类的固定相;手性固定相（CSP） 分类：根据键合的手性选择物的结构特征和手性分离机制，可以分为蛋白质CSP，多糖CSP，配体交换CSP等。 亲和色谱固定相 定义：由载体和键合在其上的配基组成，为了避免载体的立体障碍，使溶质能更好地接近配基，在配基和载体之间还有一合适长度的间隔臂。 HPAC固定相的载体：小粒径的刚性或半刚性的惰性物质（多孔硅胶）;A;2.流动相对分离的影响;在正相色谱中，由于固定相是极性的，所以溶剂极性越强，洗脱能力也越强，即极性强的溶剂是强溶剂;描述溶剂极性的方法很多，最实用的是斯奈德（Snyder）提出来的溶剂极性参数 纯溶剂的极性参数定义为：;反相键合相色谱法的溶剂强度常用另一个强度因子S表示，在正反相色谱中，溶剂的洗脱能力大体相反。例如，在正相洗脱时，水的洗脱 最强 （ 最大，为10.2），在反相洗脱中，水的洗脱能力最弱（S最小，为0）. （2）混合溶剂的强度： 正相色谱法 反相色谱法 ;（3）溶剂的选择性 ;;;（5）正相键合相色谱法 ; 吸附过程：溶质的保留主要是溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用的结果 分离选择性： 正相键合相色谱法的分离选择性决定于键合相的种类，流动相的强度及试样的性质总的来说：在正相键合相色谱中组分的保留和分离的一般规律是 极性强的组分保留因子k大，后洗脱出柱。 流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分k减小，tR 减小。;（6）反相键合相色谱法;保留行为的主要影响因素 1、溶质的分子结构（极性） 极性越弱，与非极性固定相的作用力越强（疏水性增强），k越大，tR也越大 同系物碳数越多，极性越弱，k越大； 引入极性取代基，降低疏水性，k值变小。 ;2、固定相 键合烷基的极性随碳链的延长而减弱，因此与非极性溶质的相互作用力增强，溶质的k也增大。 当链长一定时，硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的k越大。 3、流动相 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k越大 溶剂的极性：水的极性最强，因此当溶质和固定 相不变时，水的比例增加，则溶剂强度降低， 使溶质的k增大 ;有机溶剂含量增加：溶质的k增大 pH的变化：影响弱酸、弱碱的离解。流动相的pH降低，弱酸k增大，tR增大，弱碱k变小，tR减小 离子抑制色谱法（ISC ） 用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相的pH，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏水缔合作用，使k变大。 适用于3≤pKa≤7的弱酸、7≤pKa≤8的弱碱;;; 定义：把离子对试剂加入到含水流动相中，组分离子在流动相中与离子对试剂的反离子（counter ion）生成中性离子对，增加溶质与非极性固定相的作用，使k增加，改善分离效果。 ;离子对模型;影响保留因子的因素 （1）离子对试剂的种类和浓度： 碳链长度增加，溶质的k增大； 在一定范围内试剂的浓度升高， 溶质的k增大。 分析酸类或带负电荷物质：用季铵盐， 如四丁基铵磷酸盐（TBA）和溴化 十六烷基三甲基铵（CTAB）等。 分析碱类或带正电荷的物质： 用烷基磺酸盐或硫酸盐，如正戊烷基 磺酸钠（PICB5）、正己烷基磺 酸钠（PICB6）。 ;;（8）其他高效液相色谱法; （二）手性色谱