不同的分离方法和培养条件对无黑素黑素细胞体外培养的影响.pdf

万方数据 黑素细胞???；随后，??在外界信号的刺激下进一步向下迁移至毛球部并分化成成熟黑素细胞。其中??仅表达??、???????籄??且?种低分化状态的黑素细胞，具有较低的黑素颗粒合成能力，无着色功能，不与酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白???芴蹇固宸从Γ籔??且恢諨?????????????????????．?、Ⅱ冲．?、???某墒旌谒叵赴??哂薪锨亢谒?颗粒的合成能力，主要负责毛发的着色??】。??具有细胞体积小、多呈双极性的特点，黑素合成能力较低，在体外培养具有增殖和分化成为??的能力。??具有细胞体积大、呈树突状外形的特点，处于高分化状态，在体外培养过程中无增殖分化能力，但具有合成黑素颗粒的能力??黑素细胞中，负责黑素合成分泌的特殊细胞器称为黑素小体。根据其特性，黑素小体有四个分型：?臀6嗯???四谔澹?院?蟹岣凰ú闫矫嫱?竦鞍孜L卣鳎??型的典型特征是形成特定排序加工的有条纹状黑素小体前体；??秃谒匦√蹇?始合成黑素，内部有明显可见的光条纹；?型是成熟的完全着色的黑素小体，聚积在细胞树突中【?俊???泻?蟹岣坏腎期、?期黑素小体，偶尔可观察??期黑素小体，不含有?期黑素小体，??中含有?獻?秃谒匦√錥?。毛发着色和表皮着色的最大区别在于：毛发着色是随着毛发生长周期变化的更替过程，而表皮着色是一个连续发生的过程。毛发着色的过程主要发生在毛发生长期的初期，此时黑素干细胞增殖分化成两种黑素细胞类型：定位于外毛根鞘的??和定位于毛球部的???‘?。在毛发生长期的??疘?冢??虿康???大量聚集，黑素大量合成，毛干着色发生。这一着色过程持续到生长期?鬒期，停止于退行期早期。在退行期?期毛球部??发生凋亡，持续到退行期??诘蛲龃?。?芄鄄斓胶谒厮槠琜?縪健康人毛发着色一直重复这一过程，在大约第十个毛发生长周期??曜笥?【???空庖桓龉?谭⑸?浠???虿亢谒?细胞数量减少、活性减弱，不能维持长时间的生长期毛发着色，因而逐渐产生白发【·¨。毛发着色过程如下：在毛囊生长期初期，黑素细胞能够合成黑素，通过树突状突起将黑素转运至邻近的毛干皮质和髓质。进入退行期后，黑素细胞发生老化甚至凋亡，黑素合成停止，树突亦逐渐消失。上皮、间质和神经外胚摘要Ⅱ 万方数据 层相互作用，共同调控着毛囊黑素细胞的代谢和毛干的着色。在黑素转运过程中，黑素细胞的树突起吞噬、聚集黑素小体并通过吞泡吐泡作用将其转运至邻近上皮细胞的作用。这些上皮细胞与黑素细胞一样能够吞噬、聚集黑素小体，区别在于这些上皮细胞并不发生退化【???影响诱发白发的因素多种多样，比如：干细胞龛微环境的改变，活性氧及机体内神经内分泌因子水平的变化均可诱导产生白发。然而，在白发发生过程中?????抑腥魏卫嘈偷暮谒叵赴?家2幻舾校?艿礁?啾；ぃ?婊钍奔?更长【?】。因此，无黑素黑素细胞是研究毛发着色及白发复色治疗最好的细胞模型。本课题的研究主要包括以下两个方面：??冉螰?结合酶消化方法与几种不同的无黑素黑素细胞的体外培养方法由于毛囊是易于获取的组织，并含有近?％的干细胞，在再生医学中，毛囊为自体细胞疗法治疗烧伤患者、白癜风的复色治疗、或促进慢性溃疡的愈合甚至神经再生有着重要作用【???。毛囊的黑素细胞分为两种类型：分布在漏斗部和毛球部的色素化树突状黑素细胞???，及存在毛囊中下部外毛根鞘的无黑素黑索细胞???????。??已高度分化，增殖能力有限，外毛根鞘来源的??分化程度低，增殖潜力大【??。因此，??的体外培养模型可以作为研究白发、白癜风等色素障碍性疾病的发病机制的基础，也可以用来筛选治疗这些疾病的药物和方法。【目的】比较不同的无黑素黑素细胞的体外培养方法。【方法】采用???易耆〖际酰?由嫌呕?拿赶??椒ǎ?湟詓????黑素细胞培养基培养获取无黑素黑素细胞。实验分为三组，每一组五个培养样本，每个培养皿放置?个分离消化毛囊进行培养。实验分为三步：第一步，单纯酶消化步骤过程复杂，为了优化便捷获取单位毛囊过程，结合???易耆〖际酰?讲酶消化步奏从三步简化至一步，大大缩短酶消化时间。第二步，在优化的单位毛囊获取方法的基础上，摸索最适宜的酶消化时间，缩短细胞迁出时间并提高细胞迁出率。第三步，对比直接拔取法、酶消化法及??酶消化法：同一批次的毛囊，使用三种不同方式获取，放置在一样的培养条件下，比较得出??硕士学位论文?? 万方数据 酶消化法培养的毛囊细胞迁出率要高于直接拔取法及单纯酶消化法，且细胞迁出时间更短。将培养出的细胞通过免疫荧光和透射电镜的方法进行鉴定。【结果】?現??赶??ǖ南赴?ǔ鍪奔涿飨远逃谥苯影稳∨嘌??按?趁赶??ǎ?且细胞迁出率明显增加。??湟訤?及酶消化的培养方式，可以简化没消化步骤，可以节省近一半的酶消化时间及经济