蛋白质的高级结构详解.ppt

生物化学;;主要内容; 蛋白质构象研究方法;X射线衍射法 ;X射线衍射法;紫外差光谱; 各种因素对吸收谱带的影响表现为谱带位移、谱带强度的变化、谱带精细结构的出现或消失等。谱带位移包括蓝移和红移。蓝移指吸收峰向短波长移动，红移指吸收峰向长波长移动。极性增大会引起蓝移，反之引起红移。 ;荧光与荧光偏振;荧光分析影响因素 1）溶液pH值 2）温度 3）溶剂极性的影响 4）激发光源 5）器皿污染的影响 6）内滤效应的影响 7）稀样品溶液的影响; 荧光偏振与荧光探针结合常常用于测定蛋白质的疏水微区，研究酶与底物、辅因子与抑制剂结合过程中蛋白质构象的变化。 荧光探针：与蛋白质或其他大分子结构非共价相互作用而使一种或几种荧光性质发生改变的小分子物质。 ;圆二色性;;光谱类型;;广义的 范德华力 ;; 蛋白质溶液系统的熵增加是疏水作用的主要动力。当疏水化合物或基团进入水中时，它周围的水分子将排列成刚性的有序结构即所谓笼形结构笼形结构(clathrate structure)。与此相反的过程（疏水作用），排列有序的水分子（笼形结构）将被破坏，这部分水分子被排入自由水中，这样水的混乱度增加即熵增加，因此疏水作用是熵驱动的自发过程。 ;蛋白质的结构;;蛋白质的一级结构;;蛋白质的结构;蛋白质的二级结构;;（1）肽链空间构象的基本结构单位为肽平面或肽单位。所谓的肽平面是指肽链中从一个Cα原子到另一个Cα原子之间的结构，共包含6个原子（Cα、C、O、N、H、Cα），它们在空间共处于同一个平面。如下图所示： ;（2）肽键上的原子呈反式构型（除Pro的肽单位以外 ） ;（3）肽键C-N键长为0.132nm,比一般的C-N单键 (0.147nm)短，比C=N双键(0.128nm)要长， 具有部分双键的性质(partial double-bond character)，不能旋转。而?Cα-COOH、C-NH2，为真正单键(pure single bond)，可以旋转。;;(4) 相邻肽平面构成二面角 ：一个Cα原子相连的两个肽平面，由于N1-Cα和Cα-C2(羧基碳)两个键为单键，肽平面可以分别围绕这两个键旋转，从而构成不同的构象。一个肽平面围绕N1-Cα(氮原子与α—碳原子)旋转的角度，用Φ表示。另一个肽平面围绕Cα-C2(α-碳原子与羧基碳)旋转的角度，用Ψ表示。这两个旋转角度叫二面角(dihedral angle)。通常二面角(Φ,Ψ)确定后，一个多肽链的二级结构就确定了。;;;2.蛋白质二级结构主要类型有：α-螺旋、β-折叠、 β-转角;;;;; α-螺旋在许多蛋白中存在，如α-角蛋白、血红蛋白、肌红蛋白等，主要由α-螺旋结构组成。;;影响α-螺旋稳定的因素： ;(2) β-折叠(β-pleated sheets)又称β-片层、β-结构，其结构要点如下：;;;;;;(3) β-转角:又称β-弯曲，β-回折或发夹结构。指蛋白质的多肽链在形成空间构象时经常会出现180。的回折，回折处的结构就称为β-转角。一般由四个连续的氨基酸组成，第一个氨基酸的羧基与第四个氨基酸的氨基形成氢键。也有一些是由第一个氨基酸的羧基与第三个氨基酸的氨基形成氢键。 ;;（4） 其它形式的二级结构;无规则卷曲;;纤维状蛋白质的结构;;;;;;;（二）超二级结构和结构域;;;;;;;2．结构域（structural domain）;;;;;蛋白质的三级结构;肌红蛋白是第一个被确定具有三级结构的蛋白质;;; 三级结构形成后，生物学活性必需基团靠近，形成活性中心或部位，即蛋白质分子表面形成了某些发挥生物学功能的特定区域。 结构如图所示:;;;;; 蛋白质变性（protein denaturation）是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失，这种现象称为蛋白质变性。 ;;;;;蛋白质结构的研究;蛋白质的四级结构;;;;;;;;;本章总结; 蛋白质的四级结构