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第三章 植物离体快速无性繁殖技术和脱毒培养技术 第一节、植物离体快速繁殖技术 一、植物离体快速无性繁殖的概念及其意义 1 概念 离体无性繁殖：指利用组织培养的方法进行植物离体培养，在短时间内获得大量遗传性一致的个体的方法，又称“离体繁殖，快速无性繁殖、微型繁殖”。 试管苗：由离体无性繁殖获得的植株称试管苗。 无性系：指有同一个体通过无性繁殖产生的一个群体，它们的遗传背景基本一致。 2 应用 （1）用来加速难繁殖和繁殖速度慢的植物的繁殖。 （2）无病毒苗木的繁殖。 （3）用于某些杂合园艺植物的繁殖。 （4）用于需要加速繁殖的特殊基因型。 二、植物离体快速无性繁殖的特点 1 优点 （1）首先体现在一个“快”字上。 （2）可人为控制条件，不受大自然的干扰 （3）快速培养脱毒苗。 2局限性 （1）一些植物快速无性繁殖技术的某些环节还没有突破。 （2）??对其成本、技术等进行估算。 （3）随继代次数增多，培养材料的分化能力下降。 三、离体无性繁殖中器官的发生形式 1 不定芽型 ２器官型 ３器官发生型 ４类胚体发生型 ５原球茎型 四、离体无性繁殖的程序 ?无菌母株的制备 ?茎芽的增殖 ?诱导生根 ?炼苗 ?再生植株的鉴定 五、植物组织培养中应注意的问题 １ 褐变 （１）褐变 褐变：指在组织培养过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。 （２）克服褐变的方法 　　　选择适宜的外植体（幼嫩材料、春季取材） 　　　改善营养条件（连续培养） 　　　在培养基中加入一些附加物 ２　污染 （１）特点： 细菌污染的特点 在培养材料附近出现黏液状菌斑，一般接种1-2天一5可发现。特别应注意一种呈乳白色的细菌污染，这种细菌为芽孢杆菌，外被荚膜，耐高温，一般灭菌剂难以杀死，可随培养材料、用具传播，可出现在培养基表面，也可呈滴形云雾状存在于培养基内，发现及时淘汰，并对用过的器具严格高温灭菌。 真菌污染的特点 培养基上长霉，一般接种3-5天就可先，霉的颜色有黑、白、黄等，真菌污染的特点是污染部分有不同颜色的霉菌，接种3天，有时多达10天才能表现。 （２）克服方法： ?外植体灭菌不彻底 ?培养基及各种器具清洁灭菌不彻底 ?人为因素 ?超净工作区被污染 ?环境不清洁 ３玻璃化 （１）玻璃化 玻璃化：是试管苗的一种生理失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的茎、叶往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。 （２）克服方法 ?增加固体琼脂浓度，使细胞吸水受到阻碍。 ?提高培养基中的Ｃ、Ｎ比。 ?控制温度，增加自然光照。 ?附加一些物质 第二节、植物的脱毒技术 一、病毒的特性及其侵染 １病毒的特性 ２植物病毒的侵染途径 ３病毒在植物体内分布不均匀的原因 （１）分生组织中无微管系统，病毒不易移动。 （２）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很强，有竞争状态，抑制了病毒的复制。 （３）在分生组织中存在高水平的内源激素，可以抑制病毒的增殖。 二、脱毒的方法 １物理方法 （１）射线（Ｘ射线、紫外线等） （２）热处理 ２　化学方法 　 嘧啶、嘌呤类似物、抗生素等 ３生物学方法 （1）茎尖脱毒 茎尖脱毒的原理：病毒的传播：微管系统 和细胞的胞间连丝传播，以微管组织为主。 茎尖脱毒的技术关键： ?同一种病??在植物体内分布部位不同。 ?不同种类病毒在同一植物中分布位置不同。 ?茎尖越小，对培养基要求越高，成功率低。 ?茎尖越小，剥离技术要求高。 （2）愈伤组织脱毒 （3）微体嫁接脱毒 原理：把极小的茎尖〈0.2mm作为接穗嫁接到砧木上，然后连同砧木一起在培养基上培养，由砧木吸收培养基中的营养，接穗在砧木的哺育下很容易成活。 技术关键 ?微体嫁接要求剥离技术高。 ?筛选培养基时要考虑到砧木与接穗对培养基营养组成的不同要求。 ?取材季节，春季容易成功，嫁接率高。 珠心组织脱毒 珠心胚与微管组织无关 三、茎尖培养脱除病毒的程序 １取材和灭菌 （１）材料的大小 （２）取材时间 （３）优良种质 （４）生长健壮 （５）年龄 ２茎尖剥离（１）防止茎尖被损伤。 （２）注意保湿 （３）避免污染 3.初代培养 注意GA的应用 4.分化培养 可以先诱导愈伤组织，然后在诱导分化形成苗。 茎尖培养可以与热处理和化学脱毒相结合。 5无病毒植株的鉴定 （１）血清鉴定法 （２）生物学鉴定法 （３）电子显微镜检查法 6无病毒种苗的保存与利用 保存： 隔离种植保存 离体保存 利用：建立良种繁育场