流式常用荧光染料讲课.docVIP

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料 流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？ ??? 首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。 发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm； ??????????????? 氦氖离子气体激光管发射光波长633nm； ????????????????488nm激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）； ??????????????? PE（藻红蛋白） ??????????????? PI（碘化丙啶） ????????????????CY5（化青素） ??????????????? preCP(叶绿素蛋白) ??????????????? ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。 ?激发光和发射光波长，如下： ?激发光波长（nm）发射光峰值（nm）FITC488525???绿）PE488575（橙红）PI488630（橙红）ECD488610（红）CY5488675（深红）PreCP488675（深红） 流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器 名????称Ex波长(nm)Em波长(nm)???备????注激光器Hoechst 33342 355?465?DNA染色核酸标记351nm紫外激光器Hoechst 33258365?465?DAPI372?456?Indo-1350?405?细胞内钙离子标记FITC490?520?标记抗体488nm?氩?离?子?激?光?器R_PE480?578?PE_CY5480?670?PE_CY5.5480?695?PerCP490?675?Alexa Fluor 488 494?517?PE_Texas Red 480?613?Rhodamine 123 500?540?线粒体标记Fluo-3506?526?细胞内钙离子标记DiOC6(3)480?501?内质网标记YOYO-1490?510?DNA染色核酸标记Propidium Iodide530?615?Acridine Orange490?640?APC650?660?标记抗体633nm氦氖激光器Alexa Fluor 647 650?668?CY5650?667? 流式?细胞仪交流论坛： HYPERLINK /forum-181-1.html \t _blank /forum-181-1.html  HYPERLINK /yp/product-list-692.html \t _blank 荧光染料谱 染料名称Excitation(nm)Emission(nm)分子量备注信息Reactive and conjugated probesHydroxycoumarin325386331Succinimidyl esterAminocoumarin350445330Succinimidyl esterMethoxycoumarin360410317Succinimidyl esterCascade Blue(375);401423596HydrazidePacific Blue403455406MaleimidePacific Orange403551??Lucifer yellow425528??NBD466539294NBD-XR-Phycoerythrin (PE)480;565578240 k?PE-Cy5 conjugates480;565;650670?aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum RedPE-Cy7 conjugates480;565;743767??Red 613480;565613?PE-Texas RedPerCP490675?Peridinin chlorphyll proteinTruRed490,675695?PerCP-Cy5.5 conjugateFluorX494520587