2--2土壤中尿素的细菌的分离与计数(已用)资料.ppt

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;一、课题背景;1、实例：; 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法：⑴ 抑制大多数微生物的生长 ⑵ 造成有利于该菌生长的环境 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板划线法或稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。;15.0g;①从物理性质看此培养基属于 培养基，是由于加入了凝固剂 。 ②从功能上看属于 培养基，此培养基的 只有尿素，能利用尿素的微生物可分泌脲酶，因此能在此培养基上生长，此培养基属于 培养基。; 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。;;（1）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 （2）常用方法：稀释涂布平板法。;想一想，如何根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？;实例分析P22;注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度涂布三个或三个以上的平板，培养统计菌落数，计算出菌落平均值。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右时为最好。;2、显微镜直接计数：;　 将含已知数目的红细胞液体与待测的菌液按1：1均匀混合，在显微镜下数出各自的数目，然后求菌液中的细胞数目。;　　举例：已知红细胞浓度为M个/mL，从体积为N mL的大肠杆菌培养液中取出大杆菌液与红细胞液等量均匀混合后，涂片，染色，镜检。在同一视野中发出有红细胞W个，大肠杆菌Y个，求NmL大肠杆培养液中大肠杆菌的个数X是多少？;2.用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。在某稀释浓度下某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是(　　) A.菌落数量最多的平板 B.菌落数量最少的平板 C.菌落数量适中的平板 D.取若干个平板菌落数量的平均值; 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。;教材提供的案例中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种： 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 如何设置对照实验来确定原因？ 方案一： 其他同学用与A同学一样的土样进行实验。 如果结果与A同学一致，则证明A同学操作无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。;教材提供的案例中A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种： 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 如何设置对照实验来确定原因？ 方案二： 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。;;实验设计：;二　实验设计与操作;菌落计数;（一）土壤取样;◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行; 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？;（四）取样涂布;3.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是(　　) A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板。 B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上。 C.将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时。 D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数。;4.测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是(　　) A.细菌个体小，真菌个体大 B.细菌易稀释，真菌不易稀释 C.细菌在土壤中数量比真菌多 D.随机的，没有原因;（五）微生物的培养与观察并计数;微生物的培养与观察;;〖注意〗研究未知的微生物，一定要注意进行规范的无菌操作，以防被致病的微生物感染，实验后，一定要洗手。;1、酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 2、伊红—美蓝培养基： 鉴定大肠杆菌。 原理：代谢产物与伊红—美蓝结合→ 菌落呈深紫色并带有金属光泽。;1.实验设计和操作提示;样 品 的 稀 释 和 涂 布;培 养;计 数;三、操作提示 ;（二）如何判断样品的稀释操作是否成功？;课题 小结;1.对