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分离纯化方法2-----电泳技术（上）;Electrophoresis第一节　电泳概述第二节　核酸电泳第三节　蛋白质电泳;第一节 电泳概述;一、电泳技术的发展;1940年左右：以纸为支持物的电泳问世。 60年代以后：发展了以凝胶为主的支持物的电泳方法，如聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶电泳等。 1967年，Shapiro 发明SDS电泳。 1969年，Weber应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定了蛋白质的分子量 。 1970年，Laemmli发明不连续SDS电泳。 ;70年代以后推出了多种电泳模式： 圆盘电泳、垂直板电泳、双向电泳、脉冲电泳、等电聚焦电泳、印迹转移电泳等技术 1975年，O’Farrell 发明了ISO-DALT双向电泳技术。 1985年，Gorg 发明了IPG-DALT双向电泳技术。 90年代推出了分辨率极高的高效毛细管电泳。;二、电泳的定义及常用术语;2、电泳迁移(electrophoretic migration)：EM，单位是cm 在电泳过程中，带电粒子在电场的作用下做定向移动。 3、迁移时间(migration time)：用t表示，单位是min 在电泳过程中，带电粒子在电场的作用下做定向移动所用的时间。 4、电泳速度(electrophoretic velocity)：用V表示 在单位时间内，带电粒子在电场的作用下做定向运动的距离，单位是cm /min。 5、电场强度(electric field strength)：用E表示 在给定的电泳支持物两端电极施加电压后所形成的电效应，单位是 V/cm。 E = V /L 式中V为电压，L为两端电极的距离。;A ;7、相对迁移率(relative mobility)：用mR 表示样品的迁移距离与示踪染料的迁移距离之比即为相对迁移率，即 样品的迁移距离(cm) mR = ————————————— 示踪染料的迁移距离(cm);在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。 ;若将带净电荷Q的粒子放入电场，则该粒子所受到的电荷引力为： F引=E Q （1） 在溶液中,运动粒子与溶液之间存在阻力F阻 F阻=6πrηV 当F引=F阻时 EQ= 6πrηV 由上式可以看出,粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E) 和粒子所带电荷量(Q)成正比,而与粒子的半径(r)及溶液的粘度 (η)成反比。非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大 的阻力，即粒子的泳动速度与粒子形状有关。; 由（4）可知，带电粒子的泳动速度受电场强度影响，使得同一种带电粒子在不同电场里泳动速度不同，为了便于比较，常用迁移率 m（或称泳动度，指带电粒子在单位电场强度下的泳动速度）代替泳动速度表示粒子的泳动情况。 m = V/E = Q/6πrη （5） 由上式可以看出，迁移率仅与球形粒子所带电荷数 量，粒子大小及溶液粘度有关而与电场强度无关。 ; 由于蛋白质、氨基酸等的电离度α随溶液pH变化而不同，所以实际上常使用有效迁移率。有效迁移率U为迁移率m和当时条件下电离度α的乘积。 U = m α （6） 将（6）式代入（5）式得： U = （7） ;Ｂ、带电颗粒移动的影响因素;2．电场强度：E ↑ 则 υ ↑。 根据电场强度分类： (1)常压电泳：E=2-10v/cm (2)高压电泳： E=70～200V／cm 。 ;3．溶液性质 pH：决定带电颗粒的解离程度和所带净电荷的量。为使电泳时pH值恒定，必须采用缓冲液作为电极液。 溶液的离子强度：0.02～O.2之间。缓冲液离子强度过高，则颗粒的电动电势越小，泳动度也越小。 粘度：粘度大，则 υ ↓;带电颗粒移动的影响因素;带电颗粒移动的影响因素;按原理分 1、显微电泳 指利用显微镜直接观察大颗粒物质电泳行为的过程。 2、自由界面电泳 又称移动界面电泳，是指在没有支持介质的溶液中进行的电泳。其装置复杂，价格昂贵，费时费力，不便于推广应用。指胶体溶液的溶质颗粒经过电泳后，在胶体溶液和溶剂之间形成界面的电泳