17β雌二醇及Wntβcatenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 目的： 观察 17β-雌二醇（17β-E2）对人成骨肉瘤细胞（MG63）中基质 Gla 蛋白（MGP） 表达的影响，及 Wnt/β-catenin 信号通路在其中的作用 ，探讨 MGP 在绝经后骨质 疏松症中可能的分子机制。 方法： 0 取人成骨肉瘤细胞 MG63 细胞株复苏，于含 5% CO2、37 C 培养箱中培养， 培养液为含有 10%FBS 的无酚红 MEM 培养液，细胞达汇片后按 5×105 细胞/瓶 接种于 25cm2 培养瓶，细胞培养液每 2 天换一次。MG63 细胞体积达到 90%左右 时，改用含 1%BSA 的无血清 MEM 培养液培养 2 天，再分别进行以下药物干预 ： （1）17β-E2 10-10、10-8、10-6mol/l、ICI 10-7mol/l、ICI 10-7mol/l+17β-E2 10-8mol/l 干预 48 小时；（2）17β-E2 10-8mol/l、DKK-1 200ng/ml、17β-E2 10-8mol/l+DKK-1 200ng/ml 干预 48 小时；（3）17β-E2 10-8mol/l、华法林 10-5mol/l、17β-E2 10-8mol/l+ 华法林 10-5mol/l 干预 48 小时，均以 1%BSA 的无血清 MEM 培养液作为对照组 ， 干预后提取 RNA 及总蛋白。用 荧光实时定量 RT-PCR 及 Western-blot 技术检 测 MGP、β-catenin、Runx2、LRP5 基因及蛋白表达的情况。 结果： -10 -8 -6 1、17β-E2 能上调 MGP 的表达。10 mol/l、10 mol/l、10 mol/l、MGP mRNA 的表达是对照组的 4.63 倍、7.16 倍、,2.95 倍（P0.05），MGP 蛋白的表达分别 是对照组的 1.17 倍、1.58 倍、1.28 倍，以 10-8mol/l 的浓度的作用最明显，差异 具有统计学意义（P0.05）。10-7 mol/L 雌激素受体抑制剂 ICI182780 与对照组相 比 MGP 表达无显著差异（P0.05），与 17β-E2 联合作用时可阻断 17β-E2 的作用， 差异有统计学意义（ P0.05）。 2、17β-E2 增加 Wnt/β-catenin 经典信号通路中相关蛋白 β-catenin、LRP5、 Runx2 的表达，Wnt/β-catenin 信号通路抑制 剂 DKK-1 下调β-catenin、LRP5、Runx2 的表达，DKK-1 与 17β-E2 联用能抑制 17β-E2 对 MGP 的上调作用，差异有统计 学意义（P0.05）。 3、MGP 抑制剂华法林下调 MGP 的表达，同时华法林与 17β-E2 联用能 抑 II 万方数据 摘要 制 17β-E2 对β-catenin、LRP5、Runx2 的上调作用，差异有统计学意义（P0.05）。 结论： 17β-E2 能明显上调 MGP 的表达， Wnt/β-catenin 经典信号通路可能是调