miR195对肝癌Bel74025FU细胞5氟尿嘧啶敏感性的影响.pdfVIP

目 录 一 中文摘要 ??????????????????????? 1 二 英文摘要 ??????????????????????? 3 三 论文正文 1. 前言 ??????????????????????? ?? 5 2．实验材料????????????????? ????? ? 8 3．实验方法?????????????????????? ? 10 4．实验结果????????? ????????????? ? 14 5．讨论???????????????????????? ? 21 6．结论???????????????????????? ? 24 四 参考文献?????????????????????? ? 25 五 主要缩略语英文索引? ??? ?????????????? 28 六 综述????????????????????????? 29 七 发表文章?????????????? ????????? 35 八 致谢????????????????????????? 36 3 miR-195 对肝癌 Bel-7402/5-FU 细胞 5-氟尿嘧啶敏感性的影响 研究生： 李 倩 导 师： 雷小勇 摘 要 目的：探讨微小 RNA miR-195 对肝癌耐药细胞株 Bel-7402/5-FU 5-氟尿嘧 啶敏感性的影响以及作用机制。 方法：运用 miRNAs 芯片技术筛选 Bel-7402 及 Bel-7402/5-FU 细胞中差异 表达 miRNAs；运用靶基因预测软件 pictar 并结合 miRNAs 芯片结果预测差异 表达 miRNAs 可能调控的 Bcl-2 基因家族靶基因；miR-195 真核表达质粒载体 pSilencer 3.1-H1 neo/miR-195 的构建；将 miR-195 真核表达质粒载体转染至 Bel-7402/5-FU 细胞；流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western-blot 检测细胞 Bcl-2、Bcl-XL、Bax、p53 蛋白表达的情况。 结果：miRNAs 芯片结果显示 Bel-7402/5-FU 及 Bel-7402 两种细胞同一 miRNA 表达量比值大于 2 的高表达 miRNA 有 miR-192 和 miR-194，同一 miRNA 表达量比 值小于 0.5 的低表达 miRNA 有 miR-195、miR-199a、miR-200a、miR-125a 等；pictar 软件预测与 Bcl-2 基因家族特异性作用的 miRNAs 有：miR-107、miR-15a、miR-16、 miR-103、miR-195、miR-122 等共 31 种，结合 miRNAs 芯片结果，选择 miR-195 作为我们研究的 miRNA；流式细胞术：Bel-7402/5-FU 细胞 miR-195 载体转染 组、阴性对照 cel-miR-67 转染组、空载体转染组及未转染组，用