miR124靶向STAT3基因对子宫内膜癌细胞恶性生物学表型的影响.pdfVIP

摘要 摘 要 研究目的：探究 miR-124 在子宫内膜癌中的表达及其对子宫内膜癌细胞恶性生 物学表型的影响及其机制，为今后的内膜癌早期诊断及生物治疗提供实验依据。 方法：我们首先利用 stem-loop RT-PCR 法检测 miR-124 在 35 对子宫内膜癌组织 及其对应的瘤旁正常组织的表达；分别运用 CCK8 法、流式细胞技术、细胞划 痕实验以及 transwell 实验，检测细胞增殖、周期、凋亡、迁移及侵袭的变化； 通过进一步的生物信息学靶基因的预测 miR-124 的靶基因，并运用双萤光报告 以及 Western Blotting 实验验证；进一步运用 Rescue 实验验证该靶基因在 miR-124 介导的抑癌功能中的作用。 结果：miR-124 在子宫内膜癌组织中的表达呈明显下调趋势,提示 miR-124 可能 在子宫内膜癌发生发展中发挥抑癌基因的功能；恢复子宫内膜癌来源的 HEC-1B 细胞中 miR-124 表达能够明显抑制细胞的增殖、侵袭和迁移，抑制细胞周期进 程，诱导细胞早期凋亡的发生；通过进一步的生物信息学靶基因的预测提示信 号转导与转录激活因子(signal transducer and transcription activator 3, STAT3)是 miR-124 的靶基因之一。双萤光报告以及 Western Blotting 实验证实，miR-124 能够明显抑制 HEC-1B 细胞内 STAT3 基因的转录，转染后 HEC-1B 细胞内 STAT3 的 mRNA 及蛋白水平均得到明显抑制；进一步敲低 HEC-1B 细胞中 STAT3 的表 达与过表达 miR-124 结果一致，能够明显抑制 HEC-1B 细胞的恶性生物学表型， 提示 miR-124 介导的抑癌功能可能是部分依赖于靶向调控 STAT3 通路产生的； 同时运用 IL-6 处理后能够部分性的恢复细胞中 STAT3 的表达，以及减弱 miR-124 对 HEC-1B 细胞恶性表型的抑制作用，这一结果表明在子宫内膜癌细胞中， miR-124 介导的抑癌功能是直接通过靶向 STAT3 产生的； 结论：我们的结果进一步确定了 miR-124 在 EC 发生发展中的抑癌基因功能及 其机制，同时为 miR-124 用于 EC 的诊断和治疗奠定了生物学基础。 关键词：子宫内膜癌；miR-124；细胞恶性表型；STAT3 ；CCND2；MMP2 II 万方数据 Abstract ABSTRACT Objective: To explore the expression of miR-124 in the EC tissues and its effects on the malignant phenotypes of EC cells, providing new avenues for EC diagnostic and treatment regiments in