第五章减压柱色谱分离技术资料.ppt

?第五章? 减压柱色谱 分离技术;第一节 真空液相色谱技术 Vacuum Liquid Chromatography 第二节 半干柱液相色谱 Semi-Dry Column Chromatography SDC ;第一节 真空液相色谱技术Vacuum Liquid Chromatography;由于经典的柱层析费时费力，需要大量的固定相和洗脱液，工作效率低，为此人们相继建立了离心薄层、 VLC、 FCC等快速层析分离的方法。其中VLC在天然产物分离中应用最多。 该法1969年由澳大利亚Coll J.C提出，1977年首次应用于分离澳洲软珊瑚中2个新的二萜化合物(Cembrenoids). ;1979年美国Targett.NM将该法命名为 Vacuum liquid chromatography (VLC), 并且详细报道了实验装置和操作方法。 从此以后，VLC便逐渐为广大化学家所接受，并且在实验装置上作了进一步改进。 ;;一、VLC特点;二、实验装置与操作 ;;Pelletier在1986年，介绍可使用于较大规模的分离的装置（图－2） ;1.固定相； 常采用TLC用硅胶、Al2O3,（粒度：10um～40um 硅胶60H或60G）聚酰胺等 2. 装柱：干法装柱法。 将吸附剂装入漏斗或短柱中，轻轻拍紧或减压拍打或从顶端挤压，直至吸附剂紧密，最后变得坚硬。吸附剂的高度一般不超过5cm。 ;3，吸附剂用量： （1）对于微量分离，样品＜100mg,可采用直径为0.5～1cm色谱柱或漏斗，吸附剂高度为5cm，一般固定相用量为10～15：1倍，如图4-a,可在小试管中收集流分。 （2）对于0.5～1.0g样品，柱中装有2.5×4cm高度的吸附剂较合适。 （3）对于1～10g样品的分离，可在柱中装入5×5cm的吸附剂。 （4）较大样品分离，最好采用250ml砂芯漏斗中进行。吸附剂的高度为5cm。（如图b）可用三角烧瓶收集之。 加大吸附剂与样品比例，可提高分离度。常用比例为30：1～300：1 ;三、上样 ;A．用低极性溶剂或洗脱剂（如石油醚、正己烷）溶解样品。常压下小心加入柱顶端，再加入洗脱剂或溶剂覆盖吸附剂表面，慢慢减压，使样品在柱顶端形成样品层。 B．可也采用固体上样法。即先将样品溶于极性溶剂，加入5～10份吸附剂，旋转蒸发至干后，加到吸附剂的表面上，然后进行洗脱。 ;四，VLC流动相选择;五、洗脱与收集;六、应用实例;;2. VLC法用于多种天然化合物的分离 （1）曾有人用VLC法对姜中辛辣???分的分离 先将冷冻干燥的姜粉用丙酮提取，经过一系列溶剂分配后，得所需部位。 选用一内径为3.5cm的100ml的布氏漏斗内装硅胶60（40～63μm,Merck公司）9.5g, 高度3cm. 300mg姜提取物的溶液与硅胶60混和，蒸发除去溶剂后，均匀分布于硅胶柱床表面上，并在样品表面上覆盖一张与漏斗内径相同的滤纸，缓缓加入25ml的己烷。待溶剂透过柱床后，开始减压抽干柱床，得第一流分。继续用极性增大的溶剂（己烷－乙醚－乙醚－甲醇）洗脱，每份25ml，共得20份洗脱液，利用该法可将姜醇与姜烯酚完全分开。 ;;（2） l．0克 pH 9-12的 Acontium columbianum粗提生物碱混合物，使用65gTLC用Al2O3 60 (Merck,H basic,Type E，EM1085)． 甲苯：氯仿＝1：4(V／V)洗脱， 于28-30号流份中得到 talatizamine(3)265mg; 氯仿:甲醇＝19：1洗脱，于35-36号流份中分离得到 cammaconine(4)247 mg。 从两个化台物结构来看，只是在 C—18位上有细微差别．若采用 PTLC法分离，操作极其繁琐、费时，且消耗大量吸附剂与展开剂．两法相比，VLC明显优于 PTLC． ;;（3）利用 VLC成功分离海洋腔肠动物的正己烷提取物．将在日本冲绳近海采集到的一种软珊瑚腔肠动物 Anemonia sulcatas切碎后用丙酮浸出，浸液浓缩后用正己烷提取，得提取物12.5g, 溶解于70 ml正己烷：乙酸己酯＝8：2的混合溶剂，用滴管将此溶液均匀添加到硅胶表面．抽真空，洗脱溶剂从正已烷开始，直至最后用乙酸乙酯，梯度洗脱，每次收集200mL，共收集2 L，耗时2小时． 结合 TLC和核磁共振谱，非常满意地分离和确定了10余种萜类、脂肪酸及其酯、甾体化台物(见图)．若用常压柱层桥，需要370g硅胶，费时30小时，耗用10 L溶剂，才得到同样的效果． ;;七. 小 结;d． VLC处理量大．分离几十克的样品，仍能以较快的速度完成。在 FCC中，由于玻璃分离柱的限制，处理6g以上的样品时就常困难．