第三章紫外可见-分子荧光_仪器分析1.ppt

　紫外-可见分光光度法 （Ultraviolet-Visible (UV-Vis) spectrophotometry ） 郭一霏 ;方法特点;主要内容;一 概述; 可见光：400-750nm； 溶液的颜色由透射光波长决定； 物质呈现的颜色是物质对不同波长的光选择性吸收的结果．如CuSO4溶液，吸收白光(复合光)中的黄光而呈蓝色． 单色光，复合光，互补色光;物质颜色与吸收光颜色的互补关系; 1.2 分子吸收光谱的产生 在分子中，除了电子相对于原子核的运动外，还有核间相对位移引起的振动和转动．这三种运动能量都是量子化的，并对应有一定能级． 若用△Ee,△Ev,△Er分别表示电子能级、振动能级转动能级差，即有△Ee?△Ev ? △Er．分子跃迁时，分子中总的内能变化： E分子 = △Ee + △Ev + △Er ; ;一 概述; 由于分子中的量子化能级是有限的，不同的物质微粒由于结构不同而具有不同的量子化能级，能级差不同，因此物质对光的吸收具有选择性． 被激发的粒子在10-8s后又回到基态，并以热的形式或荧光等形式释放能量;一 概述;;２特征;定性分析与定量分析的基础;透过光的强度(Ⅰt)和入射光强度(Ⅰo)之比称为透光度（T)： T=Ⅰt / Ⅰo 为表示物质吸收光的程度引入吸光度(A)概念： ;2.2 朗伯比尔定律 朗伯定律（1760年）：光吸收与溶液层厚度成正比 比尔定律（1852年）：光吸收与溶液浓度成正比 当一束平行单色光垂直照射到任一均匀非散射的含有吸光物质介质时，吸光度与吸光物质的浓度及吸收层厚度成正比——朗伯比尔定律 ; 数学表达：A＝lg(1/T)=Kbc 其中，A:吸光度，T:透射比， K:比例常数，b:溶液厚度，c:溶液浓度 k与物质的性质、入射光的波长及温度等因素有关． 吸光系数(a) 当c以g·L-1, b以cm表示时，常数K以a表示，称为吸光系数，单位为L·g-1·cm-1 此时吸收定律为： A=abc ;; 摩尔吸光系数表明物质对某一波长光的吸收能力，ε愈大，表示该物质对某波长光的吸收能力愈强，测定的灵敏度就愈高，因此进行吸收测量时，为了提高分析的灵敏度，必须选择摩尔吸光系数大的化合物，以及选择具有最大ε值的波长作入射光． 实际上由实验结果计算ε时，常以被测物质的总浓度代替吸光物质的浓度，则得到的ε值实际上是表观摩尔吸光系数． ;吸光度具有加和性．在某一波长，溶液中含有对该波长的光产生吸收的多种物质，那么溶液的总吸光度等于溶液中各个吸光物质的吸光度之和：A1 = e1bc1 A2 =e2bc2 A = e1bc1+ e2bc2 根据吸光度的加和性可以进行多组分的测定以及某些化学反应平衡常数的测定 各物间无相互作用，则测得的吸光度为各种吸光物质吸光度之和。;2.3 吸收的测量;22;2.4 应用比尔定律的局限性;;2.4.1.比尔定律的基本限制;正偏差：;2.4.2.非单色光引起的偏离 ;;当入射光为复合光时（ε1?ε2），标准曲线不再是直线关系，将式（5）对c微分，则 　　　　　　　　　　　　　　　　　 上式右边恒为负值，说明用复合光作入射光时，标准曲线向浓度轴弯曲，使发生对于比尔定律的偏离． ε1与ε2相差愈大，吸收池愈厚，偏离比尔定律愈严重 ．;30;2.4.3 溶液中化学反应引起的偏离;三 紫外及可见吸收测量用仪器;3.1 光源; 3.2 单色器 ;(1)棱镜的色散; 光栅 原理：利用光的衍射与干涉作用制成的 范围：紫外、可见及红外光域，而且在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致的分辨能力 优点：它具有色散波长范围宽、分辨本领高、成本低、便于保存和易于制备等优点 缺点：各级光谱会重叠而产生干扰,可用二维色散技术克服 ;3.3 试样容器 ;;对检测器的要求;光电管 ;光电倍增管;3.5 信号指示系统(读数指示器) 作用：放大信号并以适当方式指示或记录下来． 常用的信号指示装置：直读检流计、电位调节指零装置以及数字显示或自动记录装置等．很多型号的分光光度计装配有微处理机，一方面可对分光光度计进行操作控制，另一方面可进行数据处理． ;3.6 紫外可见分光光度计的类型;单光束分光光度计;