遗传学实验教学-g实验七聚合酶链式反应技术与应用资料.ppt

实验七 PCR聚合酶链式反应技术与应用;一 实验目的;二 实验原理;聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）是20世纪80年代发展起来的一种体外核酸扩增系统。由于其快速（数小时）、灵敏（ng甚至fg级的靶DNA）、操作简便（自动化）等优点使其在短短的数年时间内即被广泛地应用于微生物学、考古学、法医学、体育等领域，并已普及到许多普通实验室。PCR技术原理是将欲扩增的DNA作模板，以和模板正链和负链互补的两种寡聚核苷酸作引物，经过模板DNA的变性、模板与引物结合复性及在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸反应的三步循环来扩增两个引物间的DNA片段。每一循环的DNA产物经变性后又成为下一个循环的模板DNA。这样，目的DNA的数量将以2n指数形式累积，短时间内的30（n）个循环，DNA量就可达到原来的上百万倍。 ;整个扩增过程分三步： （1）变性：加热使模板DNA双链间的氢键断??而形成两条单链，变性温度94℃左右。 （2）退火：突然降温，在45－72℃，模板DNA与引物按碱基配对的原则互补结合；（3）延伸：72℃，在DNA聚合酶及镁离子等存在的条件下，从引物的3’端开始，结合单核苷酸，形成与模板链互补的新DNA链。;PCR反应体系;;三 实验材料;四 实验用具与药品;五 实验步骤;调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般在93－95℃预变性3－5min，进入循环扩增阶段：变性→退火→延伸，循环25－35次，最后在72℃保温7－10min。 结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或－20℃长期保存。 琼脂糖凝胶电泳检测。;六 实验作业