2015北京工业大学细胞生物学(3章技术)课程.ppt

;;;（二）荧光显微镜 Fluorescence microscope;Fluorescence image, DNA in blue and Microtubules in green;（三）激光共聚焦扫描显微境 Laser confocal scanning microscope, LCSM;;（四）暗视野显微镜 dark field microscope;把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。 环形光阑（annular diaphragm）：位于光源与聚光器之间。 相位板（annular phaseplate）：物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。;（六）偏光显微镜polarizing microscope;（七）微分干涉差显微镜 Differential interference contrast microscope （DIC）;（八）当代显微镜的发展趋势;二、电子显微镜;以电子束作光源，电磁场作透镜。电子束波长与加速电压(通常50~120KV)的平方根成反比； 由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、电源系统等5部分构成； 分辨力0.2nm，放大倍数可达百万倍； 用于观察超微结构（小于0.2μm）。;表二、不同光线的波长;TEM LIGHT PATHWAY;透射电子显微镜;2. 制样技术;2）负染技术;3）冰冻蚀刻 freeze-etching;20世纪60年代问世，用来观察标本表面结构； 分辨力为6~10nm，因人眼的分辨力（区别荧光屏上距离最近两个光点的能力）为0.2mm，扫描电镜的有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。;Scanning electron microscope（ SEM）;工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。;SEM LIGHT PATHWAY;人类红细胞;（三）扫描隧道显微镜scanning tunneling microscope，STM;扫描隧道显微镜原理;STM image of a DNA molecule;三、显微操作技术micromanipulation technique;显微操作仪;;第二节 生物化学技术;Step-by-step procedure for the purification of organelles by differential centrifugation.;Column chromatography;SDS polyacrylamide-gel electrophoresis (SDS).;Two-dimensional polyacrylamide-gel electrophoresis;Electron-microscopic autoradiography;第三节 细胞培养与细胞工程;（一）动物细胞培养;;原代培养 （primary culture）：即：培养来自动物机体的细胞群。将细胞转移到新的容器中培养称为传代或传代培养（passage），每代细胞分裂约3-6次。 细胞系（cell line）：原代培养细胞成功传代即为细胞系。 细胞株（cell strain）：从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 克隆（clone）：亦称无性系。指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。;（二）植物细胞培养;二、细胞工程;Preparation of hybridomas that secrete monoclonal antibodies against a particular antigen (X). ;;几种模式生物