临床试验工作小结.pptVIP

产 品 临 床 试 验 工 作 小 结;《基础分子生物学》中的几个概念;2/ 核酸（nucleic acid）： 是生物体细胞内一类重要的生物大分子。其主要生物学功能是作为遗传信息的载体。;DNA的结构：;3/ 染色体的组装（真核生物）;4/ 染色体组;产品临床试验工作可分为五方面： 一、工作前的计划与准备：试验方案拟定与试验用品的准备； 二、试验样本准备：人全血基因组DNA提取及信息整理； 三、试验样本检测：RT-PCR检测及结果分析； 四、工作流程中问题的发现、交流与解决； 五、收尾与总结。;一、工作前的计划与准备 种类与数量;二、试验样本准备：人全血基因组DNA提取 节奏与程度;提取步骤： 1、第二次加入细胞裂解液CL（裂解红细胞）时，需要剧烈振荡，以充分混匀沉淀（可见管中液体深红，并有较多泡沫，管底无结块沉淀）； 2、加入缓冲液GB后，充分颠倒混匀（如不充分，可能会产生白色沉淀，一般37℃放置时会消失，不影响后续试验）； 3、56℃水浴时间延长至30 ~ 40 min，其间颠倒混匀数次，观察溶液是否变得清亮，并为收集管编号（如未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少、纯度不加，直接影响荧光检测）； 4、水浴后加入200 ul 无水乙醇，出现絮状沉淀，轻柔颠倒混匀（此时DNA析出，故自此步骤开始，颠倒要轻柔缓慢，否则破坏DNA结构）； 5、最后向吸附膜中间位置悬空滴加100ul 超纯水。;三、试验样本检测：RT-PCR检测及结果分析 精细、顺序、安全;RT-PCR 反应体系的分装与加样： 1、移液器的“连续吸放液”— 调移液器量程至23ul ，将排放按钮按至第一停点（第一档），再将吸头垂直浸入液面，平稳松开按钮，在液面之下，再次将排放按钮按至第一档，排出吸头尖端的气泡后，松开按钮，吸入液体，之后放液只需按至第一档即是23ul（如吸头尖端仍有气泡，可反复吸放，直至排净气泡）； 2、样本放置顺序、吸头安装顺序、试验者感知顺序三者形成“校正机制”，保障顺序加样（校正机制的建立，有助于连贯而正确地加样）； 3、移液器的吸放液要“慢吸快放”，且试验者要观察吸头尖端，进行视觉“校正”，避免吸空放空； 4、放液时，吸头先伸入液面以下放出液体，再在管壁处打净残液（如吸头仍存残液，将移液器按至第二档，将残液打至吸头尖端处，拔掉吸头，并再次安装回去，将残液打回管中）；;5、不能直接用手触摸PCR管，因为人的手上含有荧光素，沾染在管壁上的荧光素会影响荧光仪检测。操作时必须戴不含荧光物质的一次性手套并且要经常更换（应使用镊子夹取管子和管盖）； 6、吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染； 7、加样完成后，盖紧盖子，并离心； 8、超净工作台使用后，用次氯酸钠擦拭，避免试验环境污染；;结果分析：;分析中遇到的问题：