基因的体外转录和翻译精编.ppt

基因的体外转录和翻译;什么是基因的体外转录和翻译;基因表达包括：转录和翻译两个过程。;基因体外转录和翻译的作用：为研究基因转录和蛋白质翻译提供了一个十分理想实验体系和技术平台及找到了一个研究与探讨转录和翻译这两个复杂的现象的重要手段和方法。;第一节 基因的体外转录;基因体外转录体系在分子生物学和细胞生物学研究中的用途和意义：;一、基因体外转录的基本原理;能用于体外转录的质粒载体;基因体外转录体系;细胞核抽提物：DNA转录由RNA聚合酶、各种转录因子及必要的环境条件等，这一切必需由细胞提供。常用于制备细胞核抽提物的细胞有酵母细胞、兔网织红细胞和Hela细胞;(1)收集细胞：取5×106/ml的培养细胞20ml，1500rpm离心5min，用新配制的0.01mol/LPBS洗涤，收集细胞。;Date;(3)裂解细胞核：向细胞核沉淀中加入2倍体积的低盐缓冲液(20mmol/L HEPES，pH 7.9，25％甘油，1.5mmol/L MgCl2，20mmol/L KCl，0.2mmol/L EDTA，0.2mmol/L PMSF，0.5mmol/L DTT)，冰浴10min，用玻璃匀浆器匀浆。滴加入2倍核沉淀体积的高盐缓冲液冰浴 轻轻搅拌30min。;(4)收集核提取物：25000g离心30min，收集上清液后，用缓冲液透析2h后，4℃，25000g离心20min，上清液置-70℃保存