第18章支原体技巧.ppt

医学微生物学;;重 点 与 难 点 ;第一节 概述;柔膜体纲;一、生物学性状;（二）结构 无细胞壁 细胞膜 外层：蛋白质及糖类； 中层：脂质（ 磷脂为主，胆固醇占36%）；凡作用于胆固醇的物质，如皂素、毛地黄甙、二性霉素B等均能破坏细胞膜致其死亡。 内层：蛋白质及糖类。 核质：基因组小，合成代谢有限。 ;荚膜或微荚膜：抗吞噬作用。 特殊的顶端结构：黏附宿主上皮细胞表面，与支原体致病有关。;（三）培养特性 营养丰富的培养基： 10%～20%人或动物血清以提供胆固醇与其他长 链脂肪酸，多数还需添加酵母浸液、组织浸液等。 pH： 适宜7.6～8.0，但解脲脲原体最适pH为 5.5～6.5。 兼性厌氧，在含5%CO2和 90%N2中生长最佳。 繁殖方式多样，约3～4 h繁殖一代。;在培养基中的生长现象： 固体培养基： 2～7天长出直径约10～600μm的“荷包蛋样”菌落。;液体培养基： 清亮，用颜色变化单位（CCU）表示。; 鉴别点 支原体 细菌L型;;生化反应;（四）抗原结构 补体结合试验可检测糖脂类抗原 ELISA试验可检测蛋白质类抗原 血清抗体鉴定： 生长抑制试验（growth inhibition test, GIT） 代谢抑制试验（metabolic inhibition test, MIT） ;（五）抵抗力 对化学消毒剂敏感，对结晶紫、醋酸铊、亚碲酸钾有抵抗力； 对影响细胞壁合成的抗生素如青霉素类天然耐受，但对干扰蛋白质合成的抗生素如强力霉素、交沙霉素等敏感。 ;二、致病性与免疫性;（二）所致疾病 存在广泛，多不致病； 肺炎支原体引起原发性非典型性肺炎； 解脲脲原体、人型支原体和生殖支原体可引起泌尿生殖系统感染和不育症； 穿透支原体和发酵支原体为艾滋病的辅助致病因素。;（三）免疫性 固有免疫 适应性免疫 体液免疫： 抗膜蛋白的抗体包括IgM、IgG和SIgA。 细胞免疫： 主要是特异性CD4＋Th1 细胞分泌细胞因子。;0.2～0.3μm，高度多形性； 初次分离约10天左右长出菌落；多次传代后生长加快，菌落呈“油煎蛋”状； 能发酵葡萄糖，不能利用精氨酸与尿素； 对美蓝、醋酸铊、青霉素不敏感。;致病性 主要经飞沫传播，多数发生于夏末秋初，5～15岁青少年发病率最高； 含特殊的顶端结构：P1表面蛋白（170 kDa）和P30（32 kDa）为主要的黏附蛋白； 具有超抗原作用，能刺激炎症细胞在感染部位释放大量的淋巴因子（如TNF-α、IL-1、IL-6）引起组织损伤。;所致疾病 原发性非典型性肺炎 （primary atypical pneumonia）或支原体肺炎（mycoplasmal pneumonia） 以临床症状： 咳嗽、发热、头痛、咽痛和肌肉痛为主，有时并发 支气管肺炎、皮疹、心血管和神经系统症状。 病理性变化：以间质性肺炎为主。;免疫性 血清特异性IgM、IgG及SIgA和致敏的淋巴细胞； 呼吸道局部黏膜产生的SIgA对防止再感染有较强 保护作用； 出现IgE介导的I型超敏反应，促使哮喘病急性发作。 ;分离培养 痰或咽拭子接种在SP-4培养基，挑选可疑菌落，经形态学、糖发酵、溶血性、血细胞吸附试验进行初步鉴定，进一步鉴定需用特异性抗血清做GIT与MIT实验。;血清学检查 冷凝集试验 用病人血清与人O型血红细胞或自身红细胞混合，4℃过夜时可发生凝集，而在37℃时凝集又分散解离开，但仅50％左右的患者才出现阳性。此反应为非特异性。 快速诊断 ELISA：检测P1和P30蛋白mAbs。 PCR：从痰标本中检测16S rRNA或P1蛋白基因。;预防： 肺炎支原体减毒活疫苗和DNA疫苗在动物实验中有一定的预防效果，但在人群中的应用尚未见报道。 治疗： 大环内酯类药物、 喹诺酮类药物。 ;二、人型支原体;（三）微生物学检查法;核酸检测 PCR检测： 检测16S rRNA基因。此法快速、特异，适宜于大批量标 本检测。;预防： 加强宣传教育，注意性卫生，切断传播途径。 治疗： 人型支原体对大环内酯类抗生素不敏感，对红霉素（100 mg/L）不敏感； 可用四环素类、喹诺酮类药物治疗，但有耐药株产生。;三、生殖支原体;四、穿透支原体;穿透支原体发酵葡萄糖，分解精氨酸，不分解尿 素，在SP-4培养基上生长形成典型的“油煎蛋” 状菌落； 顶端结构能黏附于人红细胞、单核细胞、CD4＋T 淋巴细胞及人尿道上皮细胞，导致宿主细胞受损 或死亡； 可能是艾滋病发病