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光学显微镜操作技术复习 1.光学显微镜的基本操作步骤 （1）显微镜的对光 对光时，应该转动转换器，让低倍物镜 对准载物台 上的通光孔，打开电光源或者调整显微镜下方的反光镜，使光线依次通过遮光器上的光圈 、载物台上的通光孔、镜筒和目镜，显微镜对光良好的标志是：眼睛在目镜处看到一个明亮的视野。如果视野太暗，可以调整电光源显微镜的 电光源亮度 ，对于普通光学显微镜，应该使用 大光圈 或者使用反光镜的 凹面 。 （2）低倍镜观察方法 将要观察的对象对准通光孔正中央（即：对准物镜），降低镜筒（或升高显微镜的载物台），使物镜接近玻片标本，眼睛看目镜，调整粗准焦螺旋使镜筒升高（或载物台下降）、物镜与玻片标本的距离不断增大，达到合适距离时，在视野中可以看到清晰物像。 （3）高倍镜观察方法 低倍镜下成像清晰后，把所要进一步观察的对象移动到视野的正中央，直接转动转换器，使高倍物镜对准通光孔，眼睛看目镜，调整细准焦螺旋至成像清晰，如果光线过暗，可以再调整电光源亮度或者换用反光镜的凹面镜、换用大光圈。 2. 显微镜使用过程中的相关问题讨论 （1）显微镜的成像特点： 显微镜下看到的是反像，“上”字在显微镜下成的像是什么？如果你要把低倍镜视野中右上方的细胞移到视野的正中央，应该如何移动玻片标本？ （2）显微镜的放大倍数 显微镜的放大倍数是指长度的放大倍数； 显微镜的放大倍数与物镜和目镜的放大倍数之间的关系是二者乘积。 放大倍数越大，显微镜视野中的细胞数目越少，视野的亮度越低（视野越暗）。 （3）如何判断视野中某一异物位于目镜、物镜、还是玻片？ 转动目镜、移动装片、换物镜进行观察，看异物是否随之移动或消失。 （4）如何才能观察到细胞中的特定结构？ 细胞中的某些结构含有色素，本身具有颜色，与其它结构区分明显，可以在显微镜下容易被观察到。例如：细胞中的叶绿体和紫色洋葱外表皮细胞中的液泡。对于一些不含色素的结构。可以采用对材料进行染色的方法来增加细胞中各结构之间的差异，从而观察到许多未染色时无法看到的结构。 一般的生物染料不能穿过活细胞膜，只有细胞被固定或细胞膜被破坏后才能进入细胞并与特定结构结合，例如观察DNA和RNA的分布和制作并观察植物细胞有丝分裂的临时装片实验中，使用 都能够杀死细胞，从而使染料分子容易进入。 也有一些染料可以使活细胞着色，如 。染液是将活细胞中线粒体染色的专一性染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。 3. 玻片标本的种类和制作方法 （1）种类：根据保存时间的长短，玻片标本可以分为临时玻片和永久玻片。 （2）制作方法：光学显微镜是通过透射光来对材料进行观察的，只能观察清楚1-2层细胞的清晰结构，所以玻片标本制作的基本要求是薄，达到这一标准的制作方法有多种，包括涂片、装片、压片和切片等。 ①涂片：把材料均匀涂抹在玻片上、得到单层细胞的方法，相关教材实验是：DNA和RNA在细胞中的分布 。 ②装片：把较小的生物体或某些器官的一部分整个装于玻片上的制片方法，它适用于小而薄的材料，相关教材实验是：观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原。 ③切片：用手工或机械方法将植物或动物组织切成薄片后再进一步制片的方法，相关教材实验是：检测生物组织中的油脂。 ④压片：将植物、动物较疏松的材料用较小的压力压碎在载玻片上，使之成一薄片的制片方法，相关教材实验是：制作并观察植物细胞有丝分裂的临时装片 。 （2011海淀0模）31．显微镜是生物学实验常用的工具，请回答下列有关问题。 （1）要在显微镜下观察到清晰的物像，首先要保证被观察的标本能够透光，其次是结构之间有一定的对比度。例如，《观察叶绿体》的实验选择黑藻叶片为实验材料，一是因为黑藻叶片＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，二是因为被观察的主要结构＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；而在《制作并观察植物细胞有丝分裂的临时装片》的实验中，需要对实验材料进行一些处理，经＿＿＿＿＿＿＿＿＿处理后解决了原始材料不透光的问题，经＿＿＿＿＿＿＿＿处理后增大了结构之间的对比度。 答案：很薄，细胞层数少 自身有颜色 解离和压片 染色 4. 显微镜实验及相关问题讨论 4.1．检测生物组织中的油滴 ①检测生物组织中的油脂的实验时能否看到细胞间脂肪滴？如何解释这种现象？ 能，在制片时细胞被切碎，细胞内的脂肪滴到细胞外。 ②染色后为什么要滴加1~2滴50%的乙醇溶液？ 洗去浮色，以免影响观察。 4.2. 观察洋葱表皮细胞的质壁分离及质壁分离复原 ①为什么选用紫色的洋葱鳞片叶外表皮做实验材料？ 具有