第07章病理制片课题.pptVIP

第六章 组织块的处理;第一节 组织洗涤;一、洗涤的目的 组织在固定后一定要把渗透到里面的固定液洗去，然后再进行下一步过程。为防止组织中留有较多的固定液而影响脱水剂，甚至可在组织中发生沉淀物或结晶而影响观察，特别是对陈旧性标本更应注意流水冲洗，尽可能减少组织中的酸性程度和甲醛色素。对混合性固定液，更应及时洗涤，有利于脱水直至切片和染色。;二、洗涤的方法;1．固定剂以水配制者 用流水冲洗，可使组织中的固定液随时溢出和随时洗去。常用的固定剂是甲醛液（10 ％甲醛水液），尸检组织、大动物组织冲洗时间为24ｈ左右，小动物组织冲洗时间为2--10ｈ左右。2． 固定剂含乙醇者 乙醇或乙醇混合液固定液者，一般不要求冲洗，如需冲洗必需采用与固定剂中的乙醇浓度相近的乙醇冲洗，不可用水冲洗，也不应用浓度相差很大的乙醇冲洗。;三、特殊固定液洗涤法;1．重铬酸钾 用重铬酸钾固定的组织可用流水冲洗12--24ｈ，或用亚硫酸，或用1 ％含水氯溶液进行洗涤。2．苦味酸 含苦味酸固定的组织，可用50 ％或70 ％乙醇浸洗。3．氯化汞 用氯化汞固定的组织内常有一种沉淀物生成，呈棱形或不规则或略圆的块状物，棱形物被认为氯化亚汞，不规则物可能是金属汞，此种结晶必需洗去，否则会使组织发脆，或染色不良。;第二节 组织脱水;一、脱水的目的和原则 组织经固定和水洗后，会有大量水分，而水与苯根本不相融合，脱水是驱除组织中的水分，以利于透明和浸蜡。概念：用某些溶剂逐步将组织块吸收的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡或火绵胶的渗入，这一过程叫脱水。;1．尸检及活检 有条件时，将组织分别进行脱水，如脑、胰腺、肌肉、胸腺或淋巴结、肝、脾等组织。因为脱水时间差异性较大，最好是单独处理。2．动物组织 应区分动物大、小，如狗组织接近新生儿组织，大白鼠和小白鼠也有差异，前者需时稍长，后者则较短。;3．脱水时间与脱水剂的关系 脱水剂的新旧（纯度）影响脱水时间，必须灵活掌握。4．穿刺组织 如肾穿刺、径胃镜取得组织等，因组织块很小，常规用擦镜纸包裹，防止丢失。;二、脱水剂的种类和效果1．非石蜡溶剂的脱水剂 如乙醇和丙酮等，其组织在脱水后必须再经二甲苯透明才能浸蜡。2．脱水兼石蜡溶剂的脱水剂 如正丁醇等组织在脱水后即可直接浸蜡，不比经过中间溶剂如二甲苯之类的试剂。; 脱水种类可根据须要选择，目前在病理诊断和实验性动物研究中，较多地采用乙醇脱水、二甲苯透明和石蜡浸透组织。 脱水方法甚多，最重要的是不应骤然进行，不能操之过急，否则可引起组织强烈收缩，或使组织发生变形，而得不到满意切片。;三、常用脱水剂的使用方法;1、乙醇（Ａlcohol 酒精） 沸点78.4℃，为最常用的脱水剂。脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相溶合。 其缺点是易使组织收缩、变脆。导致这些缺点是因为组织在高浓度乙醇（无水乙醇）中停留时间较长，或者加温脱水的温度过高。在日常中一般脱水从70%乙醇（人体组织从75%）开始，由低向高的梯度脱水。; 一般的脱水顺序是：70%、 80%、 90%、 95%①、95%②、无水乙醇①、无水乙醇②。只有脱水充分才能在透明剂中透明。;2、丙酮（Ａcetone） 沸点为56℃。脱水作用比乙醇强，但是对组织的收缩较大，而价格较高，故一般少用于组织的脱水，主要用于快速脱水或固定兼脱水。脱水时间1—3h。;3、正丁醇（Ｎ-Ｂutyl-alcohol） 为无色液体，沸点100—118℃，微溶于水，在100ml水中能溶8.3g，故脱水能力较弱，但能与水、乙醇及石腊混合，故这种脱水的组织块，可直接浸蜡包埋。 这种脱水剂兼透明剂的最大优点是很少引起组织块的收缩及变脆。;第三节 组织透明;概念： 用某些化学试剂将组织中的脱水剂置换传来，以利于浸蜡和包埋。因组织块浸入试剂后成半透明状，所以称为透明。;一、透明的目的 在制片过程中有两次透明，第一次是脱水以后组织块的透明，第二次透明是染色以后切片的透明。 组织块透明的目的是便于透蜡包埋，切片透明的目的就是有利光线的透过，便于显微镜下的观察。; 组织块在浸蜡前，必须通过透明以便使石蜡浸入组织内，起充分支持硬化组织块的作用，以便完整切片。 通常根据透明时间与肉眼观察相结合判断透明程度。;二、常用透明剂的种类和使用方法 最常用透明剂的种类较多，但使用最多的是二甲苯。;1、二甲苯 易挥发，无色透明液体，长期接触对呼吸粘膜有刺激作用。透明能力强，易使组织收缩、变脆，故组织块在二甲苯中不宜久留，特别对小动物组织材料必须严格控制好。;2、甲苯