体外分析(五年制双语).ppt

体 外 分 析 技 术In vitro Assay;体外分析技术的发展;放射免疫分析（radioimmunoassay ，RIA） 免疫放射分析（ immunoradiometric assay，IRMA） 受体放射分析（ radioassay of receptor ） 放射受体分析（ radioreceptor assay ） ;本章节内容;体外放射分析;定义;分类;Radioimmunoassay, RIA ;In 1959, Berson and Yalow established radioimmunoassay, which was used to detect the concentration of insulin in blood sample for the first time. Yalow won the Nobel Prize in 1977.;基本原理 ; K1 Ag + Ab Ag.Ab K2 K1 = Ag与Ab结合为Ag.Ab复合物的速率常数 K2 = Ag.Ab复合物离解为Ag和Ab的速率常数 K1在早期明显，K2在后期明显，经过一定时间后达到平衡状态，两者保持相对恒定，即此时单位时间内正向反应和逆向反应的速度将保持基本相等，反应式两端反应物的分子浓度保持相对稳定 亲和常数（Constant of affinity）: Ka=K1/K2 解离常数（Constant of dissociation）: Kd=K2/K1; 为了定量地测定待测样品中抗原（Ag）的含量，在这个体系中加入放射性核素标记的同类抗原（*Ag），这样在反应体系中同时存在两个平衡。 ;标记抗原（*Ag）与未标记抗原（Ag）具有相同的生物学活性与免疫活性，与抗体（Ab）具有相同的亲和力常数； 抗原和抗体只有一个结合位点，两类抗原决定簇的数目大于抗体结合簇的数目； 标记抗原抗体复合物（*Ag.Ab）与游离的标记抗原（*Ag）能够有效分离。;;Binding rate of *Ag.Ab（％）;建立标准曲线;Immunoradiometric assay, IRMA; 把放射性核素标记到抗体上，然后以过量的标记抗体（*Ab）与待测抗原（Ag）结合，将标记的抗原抗体复合物与未结合的标记抗体分离，通过放射测量可求得待测抗原的含量。该反应系统是非竞争性的全量反应。;;Binding rate of Ag. *Ab （％）;IRMA的优势;IRMA的技术;Single-site method;Two-site method;Solid Ab1(on test tube) ;Three-antibody method;RIA 和 IRMA的比较;;基本方法;标记物的制备 ;结合剂;抗体结合剂的质量要求; 特异性(specificity )：指不受交叉反应物质影响的程度，用交叉反应率来衡量。 交叉反应率（%）＝[Y]50 / [I]50×100% ; 亲和力(affinity)：是指抗原与特异抗体间相互结合的强度，以亲和力常数Ka来定量表示，通常由Scatchard作图法求得。 ;标准品的要求;待测样品的制备;分离技术;标准曲线制作;log-logit coordinates system and linear regression;系统误差（systematic error）是指由一些可以确定的原因所引起的误差，这种误差常表现为检测结果呈倾向性的偏高或偏低。引起系统误差的常见原因有：①方法误差；②仪器和试剂误差；③操作误差。 随机误差（random error）是指由难以确定且无法控制的原因引起的误差，误差的出现是随机的，由各种偶然因素造成，与真值的偏离是双相性的，小误差发生的概率多于大误差发生的概率，符合正态分布。;A. quality guidelines of determination precision 平均批内变异系数(ABCV) 反应误差关系(RER) 精密度图(PP) B. quality guidelines of determination stability and influential factors 零标准管结合率(Bo％