2DNA的复制重点.pptVIP

2.3 DNA 的复制 ; 1953年Watson和Crick在提出DNA双螺旋结构的那篇划时代的论文中，作者指出，“我们没有忽视从我们提出的特异性碱基配对可以立即提出遗传物质复制的一种可能机制”。几周以后，Watson和Crick提出了DNA复制的半保留机制，并于1958年得到Meselson和Stahl的同位素实验证实。经过几十年的研究，DNA复制的过程，参与复制过程的酶和蛋白质及其作用机制已基本清楚，但有关的一些细节，和DNA复制的调控，有待进一步深入研究。探索DNA复制的详细机制及其调控，显然是一项非常有吸引力的工作。这一领域的进展，对于我们深入理解遗传物质的传递模式，控制生物体的生长过程，控制肿瘤和艾滋病等严重疾病，均有重要意义。 ; DNA复制的概况; 亲本链 子链 ;Meselson-Stahl 实验 (1958) ;复制子(replicon):基因组中能独立进行复制的单位称为复制子。 复制起点（origin）、复制终点（terminus） 复制方式：双向、单向 单复制子、多复制子 ;复制子、复制的起点、方向;复制区往往以复制眼或复制叉的形式出现; 复制的方向;细菌通常有一个环状的染色体，DNA复制时只有一个复制起始点，因此只有一个复制子。而真核生物基因组有很多复制起始点，因此包含多个复制子。;2.3.3复制的几种主要方式;;腺病毒 DNA 复制起始;长的发夹结构;D-loop replication （D环复制） Rolling circle replication 滚环状复制(?复制) ? Replication (?复制); ? 型;滚环状复制 (rolling circle)是一种单向复制的特殊方式。许多病毒、细菌因子以及特定基因（rDNA in the Xenopus oocyte）放大的复制方式。 在双链环状DNA（+）链的复制起始点位置上进行单链特异性切断，游离出一个3′-OH和5′-磷酸基末端。在DNA聚合酶的作用下，以环状（-）链为模板，从正链的3′-OH端加入脱氧核苷酸，使链不断延长，通过滚动而合成出新的正链。可以合成比原有DNA长好几倍的单链。 5′端不断延长的游离尾巴很快被单链DNA结合蛋白结合，到一定长度后，5′端单链被切割成正链单体，进而复制最终形成双链环状DNA； 5′端单链也可以复制其互补链，经切割最终形成双链环状DNA 。 滚环状复制又叫?复制。 ;滚环复制;φX174 的复制;D环复制; D环复制;;2.4 原核生物DNA的复制;2.4.1 参与DAN复制过程的酶;B. DNA 聚合酶;DNA 聚合酶具有多种核酸酶功能;DNA聚合酶 I 1) 5’?3’聚合活性：要求有DNA双链模板和具有3’-OH的引物， 在引物3’-OH端逐个加上dNTP，新链的生长方向总是5?3。 2) 3’?5’外切活性：识别不配对碱基,停止聚合活性，激活3’?5’外切活性，切除不配对碱基。 3) 5’?3’外切活性：即从5′-P端逐个切除核苷酸的活性。必须有5′-P末端；被切除的核苷酸必须是氢键配对的；被切除的核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸，也可以是核糖核苷酸，这一活性的主要功能是缺口平移、修复突变和去除复制过程中后随链的引物。 Klenow酶: DNA聚合酶I是单一肽链的蛋白质（103 kD)，用枯草杆菌蛋白酶水解得到一个N端的小片段和C端的大片段。68kD大片段被称为Klenow片段，具有5?3聚合活性和3?5外切活性。 ;主要功能是起修复DNA的作用. ;α 亚基 (the DNA 聚合活性); ε 亚基 (3’ –5’ 外切活性); Θ亚基 (加速外切活性).;;;大肠杆菌 DNA 聚合酶; ;2.4.2 DNA复制的起始 ; ;DNA复制起始中的主要步骤a. 大约20个左右的DnaA蛋白首先与OriC中的4个9碱基重复区相结合；b. 识别并使3个13碱基串联重复区DNA形成开环结构；c. DnaB蛋白在DnaC的帮助下与未解链序列结合。每六个DnaB蛋白形成一组并与一条DNA母链结合，可在不同方向同时起始DNA的复制。当细胞中存在足够的SSB和DNA gyrase时，DnaB的解链效率非常高。 ??? 整个DNA复制过程中，只有复制起始受细胞周期的严格调控。 ??? Once in each cell cycle。;;2.4.3 DNA子链的延伸 ??? 主要包括两个不同但相互有联系的事件，即前导链和滞后链的合成。由DNA helicase解开双螺旋，由拓朴异构酶消除DNA链上的扭曲力，SSB结合使DNA单链稳定。 ??? 前导链的合成：由DnaG（primase）在复制起始位点附近合成一个10-60 nt的RNA引物，然后