研究生本科生医学分子生物学复习题重点.doc

第一章 (必修和选修) 分子生物学与医学 分子生物学是现代医学的基础。 各种疾病发生学的阐明有赖于分子机理的认识。 分子生物学引起医学诊断学与治疗学的革命变化。 当今生命科学研究的热点：遗传学、神经科学、发育生物学和免疫学。 RNA加工 RNA剪接（splicing） 外显子（exon）、内含子（intron） GT-AG法则：内含子末端的二核苷酸高度保守，绝大多数内含子以GT开始（在内含子RNA上变为GU），并以AG结束。 1.分支位点保守序列的不变A亲核攻击内含子5′端G核苷酸，形成套索（lariat）状结构。 2.在剪接供体位点切割外显子/内含子连接。 3.3 ′端外显子上游剪接受体位点的亲核攻击，引起内含子RNA以套索的形式切割并释放，并将两个外显子RNA片段连接起来。 4. 主要（GU-AG）剪接体U1、U2、U4、U5和U6 snRNA。次要（AU-AC）剪接体 5 ′加帽（capping）：7-甲基鸟苷（m7G） 作用：保护转录物免受5 ′→ 3 ′核酸外切酶的攻击； 协助mRNA从核转运至细胞质； 协助RNA剪接； 转录过程中协助胞质核糖体40S亚基附着于mRNA 3 ′多腺苷酸化（polyadenylation）AAUAAA ~200 AMP（腺苷酸残基）→poly（A）尾 作用：帮助mRNA转运至细胞质； 稳定细胞质中的mRNA； 加强mRNA被核糖体机器识别 染色体异常 1染色体数目异常：（1）.多倍体（polyploidy） 三倍体→ 双精、二倍体配子 四倍体→ 核内有丝分裂 （2）.非整倍体（aneuploid）：三体、单体 （3）.混倍体（mixoploidy）：嵌合体、异源嵌合体 2染色体结构异常：缺失，倒位，重复，插入，相互易位，罗伯逊异位，环状染色体，标记染色体等。 第二章 1.RNA基因分类及各自功能 2.高度重复DNA类型及特点 第三章 一个基因编码多个蛋白的原因 许多基因具有多个启动子 转录物的选择性剪接 RNA编辑，在转录后改变mRNA的序列 第四章 DNA测序的方法： 双脱氧DNA测序 自动双脱氧DNA测序 焦磷酸测序（pyrosequencing） 大规模平行DNA测序 基于芯片的DNA捕获方法 第五章 现代分子生物学技术基础 1）细胞DNA克隆的主要步骤。 分离纯化目的基因 构建重组DNA分子 宿主细胞的转化 含重组体的宿主细胞的筛选、扩增 分离重组DNA 2）载体的一般特性以及常用载体的种类和特点。 载体的一般特性: 分子量小，以容纳较大的外源DNA ； 有多种限制酶单一识别序列，有助于外源DNA片段插入； 载体DNA被切割并插入外源DNA后，不影响其复制能力 有标记基因，有利于筛选重组体。 克隆载体上要有复制起点，表达载体上还要有启动子。 常用在的种类和特点： (1) 克隆较小片段DNA的载体：质粒（plasmid）细菌中独立于染色体外的双链闭环DNA分子。大小约为数千碱基对。 天然质粒需经改造才能适用于DNA克隆 *插入多克隆位点：人工合成 30bp 左右的一段DNA序列，含有多种限制酶的单一切点 *插入抗生素抗性基因：如Ampr *建立用于重组子筛选的选择系统，将多克隆位点置于可表达的标志基因中间。 能够携载外源DNA分子＜ 10kb (2) 克隆中等大小片段DNA的载体： λ噬菌体（Lambda phage）： 高效感染细菌的病毒 DNA分子为线性双链5′末端是12个核苷酸突出的粘性末端，又称cos序列。 粘粒载体 将质粒和λ噬菌体改建的载体，即cos序列插入一小plasmid 中所构成. 能够携带外源DNA分子约33-44kb。 （3） 克隆大片段DNA的载体： 噬菌体P1载体： P1噬菌体: 其DNA为线性 ，体外包装于蛋白质壳内。P1 DNA进入宿主细胞后环化，扩增。 携带外源DNA片段约100kb 将P1噬菌体和F因子结合构成了PAC，携带外源DNA片段约130-150kb 。 细菌人工染色体（BAC）载体： 是基于大肠杆菌的F因子构建的、低拷贝的质粒载体。 （F因子是大肠杆菌中自然存在的一种致育质粒，编码多种参与复制、分配和接合过程的蛋白质） BAC 分子中携带：抗生素抗性标记、复制子 oriS 、利于 DNA 复制的解旋酶（RepE）以及确保低拷贝质粒精确分配至子代细胞的基因座 （ parA , parB 等 ） 它不同于一般质粒，能携带外源DNA片段 300kb （4）克隆巨大片段DNA的载体：酵母人工染色体（YAC）。 由着丝粒和端粒的DNA序列和自主复制序列组成的一种载体. 在酵母中准确复制 插入DNA片段约0.20--2.0 Mb 。 复制大片段的DNA。 3）PCR的基本原理、特点以及应用。 聚合酶链