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  • 2016-08-01 发布于河南
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RNA提取标准流程

RNA提取标准流程 原理: TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol使样品细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中,取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA。 预防RNase污染注意事项: 1. 经常更换新手套,皮肤上常带有的细菌,霉菌可能成为RNase的来源。 2. 使用灭过菌的RNA专用塑料制品避免交叉污染。 3. RNA提取过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿塑料制品高压灭菌。 4. 配制溶液应使用无RNase的水(将水加入处理过不含RNase的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.0% v/v,oC放置过夜,高压灭菌。注:DEPC有致癌之嫌,需小心操作。) RNA的提取 准备试剂:氯仿,异丙醇oC,用时取出置于冰上),75%乙醇,无RNase的水溶液均需用0.0% DEPC处理过的水配制10×Loading buffer(宝生物工程(大连)有限公司,货号:D603,35元,1mL×5支) 准备器材:1 mL、200 μL枪头、小烧杯*3、1.5 mL管、2 mL管若干、报纸、卷纸、研钵,以上物品全部需要高压。 操作步骤: 1. 研磨+匀浆将组织在液氮中磨碎(不均一的样品,如、肾上腺等腺体,必须研磨),50~100 mg组织样品(肝脏可减少样品量到30

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