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第三章 转录及其调控 2013.10.21~28 第一节 原核生物转录 DNA聚合酶在启动DNA链延长时需要引物存在，而RNA聚合酶不需要引物就能直接启动RNA链的延长。 原核生物RNA聚合酶能直接与模板DNA的启动序列结合而启动转录。 一、原核生物转录酶及相关因子 （一）原核生物RNA聚合酶 原核生物RNA聚合酶（大肠杆菌为例） 全酶=核心酶+ σ因子 大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 亚基 基因 相对分子量 亚基数 组分 功能 α rpoA 36500 2 核心酶 决定哪些基因被转录 β rpoB 151000 1 β和β共同形成RNA合成的活性中心 β rpoC 155000 1 ω ？ 11000 1 ？ σ rpoD 70000 1 σ因子 存在多种σ因子，辨认起始位点 σ因子 负责模板链的选择和转录的起始，它是酶的别构效应物，可以极大的提高RNA聚合酶对启动子区DNA序列的亲和力。 在某些细菌内含有能识别不同启动子的σ因子，以适应不同生长阶段的要求，调控不同基因转录的起始。 如大肠杆菌： σ70——辨认典型转录起始位点 σ32——辨认热休克基因转录起始位点 原核生物RNA聚合酶的活性，可被某些抗生素特异性的抑制。 如抗结核分枝杆菌药物利福平或利福霉素专一性的结合β亚基。 ρ因子 是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 能结合RNA，对poly C的结合力最强。 具有ATP酶活性和解链酶活性。 （二）原核生物转录相关因子（转录终止相关因子） 其他因子 还有一些蛋白参与、调节转录终止。如nusA蛋白协助RNA聚合酶识别某些特征性的终止位点。 这些转录相关因子的共性是：所识别的终止信号位于新合成的RNA分子中，而并非在DNA模板上。 二、原核生物转录过程 转录的起始（模板识别、转录起始） 转录的延伸 转录的终止 1.模板的识别：RNA聚合酶全酶结合到DNA的启动子上启动转录 （一）原核生物转录起始 RNA聚合酶结合模板DNA的部位，称为启动子(promoter)，是控制转录的关键部位。 Pribnow盒子（-10区）：RNA聚合酶的紧密结合位点（富含AT碱基，利于双链打开） TTGACA区（-35区）：?因子识别位点 2.原核生物转录起始过程： 转录起始：全酶与模板的DNA接触，生成非专一的，不稳定的复合物在模板上移动。 起始识别：全酶与-35序列结合，产生封闭的酶-启动子二元复合物。 全酶紧密地结合在-10序列处，DNA模板局部变性，形成开放的启动子二元复合物。（RNA聚合酶与启动子结合后造成约18bp的DNA解链） 在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物（全酶-DNA-pppGpN-OH） σ因子从全酶中解离下来，聚合酶转变为延长构型。酶分子与启动子结合力下降，延伸阶段开始。 RNA链的延伸：转录空泡(transcription bubble) 转录终止指RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。 依据是否需要蛋白质因子的参与，原核生物转录终止分为： 依赖?因子的转录终止 非依赖?因子的转录终止 （三）原核生物转录终止 第二节 真核生物转录 （一） 真核生物RNA聚合酶 酶 位置 转录产物 相对活性 对α-鹅膏蕈碱的敏感性 RNA聚合酶Ⅰ 核仁 45S-rRNA 50-70% 不敏感 RNA聚合酶Ⅱ 核质 hnRNA 20-40% 敏感 RNA聚合酶Ⅲ 核质 tRNA、5S-rRNA、snRNA 约10% 存在物种特异性 一、真核生物转录酶及相关因子 （二） 真核生物转录相关因子 转录因子 能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(transcriptional factors, TF)。 真核生物RNA聚合酶不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子，形成转录起始复合物（pre-initiation complex，PIC)。 根据转录因子的作用特点可分为二类 第一类为基本转录因子，它们与RNA聚合酶Ⅱ共同组成转录起始复合物，转录才能在正确的位置开始。TFⅡD,TFⅡA，TFⅡF，TFⅡE，TFⅡH等，它们在转录起始复合物组装的不同阶段起作用。 第二类转录因子为特异转录因子（组织细胞特异性转录因子），这些TF是在特异的组织细胞或是受到一些类固醇激素，生长因子或其它刺激后，开始表达某些特异蛋白质分子时，才需要的一类转录因子。 RNA聚合酶II与启动子的结合、启动转录需要多种蛋白质因子的协同作用。通常包括：可诱导因子或上游因子，与增强子或启动子上游元件的结合；通用转录因子在启动子处的