药品沉降菌测定法.docVIP

药品沉降菌测定法 一 目 的：为规定生产、质检洁净室（区）中沉降菌测试条件测试方法，特制定本操作规程。 二 适用范围：适用于公司生产、质检洁净室（区）的沉降菌的测定和环境的验证。 三 责 任 者：洁净度监测人员、品控部。 四 正 文： 1 质量指标及每个洁净间培养皿数量培养皿数量（不含对照皿）： 被测区洁净度级别 最少培养皿数 （φ90平皿，沉降0.5h计） 兽药GMP(2002)要求 最大平均浓度(个/30min·φ90平皿) 100级 10000级 100000级 300000级 14点 2点 2点 2点 0.5 1.5 3 5 *表中所列为最小培养皿数,当房间面积较大时,应酌情考虑增加培养皿数量。 2 测试方法： 2.1 方法概述： 本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿中，经一定时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净状况。 2.2 所用的仪器、设备 φ90平皿 生化培养箱 注：使用时应严格按照仪器说明书操作； 必须定期对培养箱的温度计进行检定。 2.2.1 条件：净化空调系统在开启状态，房间清洁 2.2.2 培养基： 普通营养琼脂培养基，培养基配制方法见附录。 时间：培养皿沉降30分钟后，用37℃温箱培养24小时。 人员要求：测试人员穿着洁净服，带口罩，手消毒或带手套。动作要轻，避免产生污染干扰。 2.3 测试步骤： 2.3.1 采样方法： 放置方法、次序：将已制备的培养皿按要求放置，放置培养皿从总平面中最靠里的房间开始布置，依次向外布，最后人员撤出。每间房间也是从房间最靠里的点开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。收取培养皿时次序相反，从最外边的房间开始收，每间房间从最靠门的培养皿开始收，最先布置的皿最后收，沉降时间略有差别。用φ90cm培养皿，在洁净房间内均匀布点测试，另外再布置1点作为对照皿。放置地面上后拿开皿盖，搭放在皿边上，沉降30分钟后，盖上皿盖收起，用37℃温箱培养24小时后，数出测菌落数，得出结论。 对照皿：对照皿放置方法为将皿盖拿开后，马上重新盖上，同样放置30分钟，收起，培养，数菌。除30分钟沉降过程为带盖沉降与测试皿不同外，其余过程均一样。目的是模拟整个检验过程，看培养皿、培养基以及人员操作过程是否对结果有影响。 培养皿放置位置：测试皿、对照皿在洁净间内均匀布置即可，一般放置在地面上，注意乱流洁净室应尽量避开送风口正下方，若有固定设备、仪器（如手术床、灌装机等），可布置在设备上。 2.3.2 培养： 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 每批培养应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照组。 2.3.3 菌落计数： 用肉眼直接计数，或在菌落计数器上点，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时，仍以2个或2个以上菌落计数。 2.4 注意事项： 2.4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 2.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。 2.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 2.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落并注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 2.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 3 测试规则： 3.1 测试状态： 3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。 3.1.2 沉降菌测试前，被测洁净室（区）已经消毒过。 3.1.3 测试状态分动态和静态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 3.2 测试人员： 3.2.1 测度人员必须穿戴符合环境洁净级别的工作服。 3.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。 3.3 测试时间： 3.3.1 对单向流，如100级净化房间及层注工作台，测试应在净化系统运行不少于10min后开始。 3.3.2 对非单向流，如10000级以上的净化空间。测试应在净化空调正常运行不少于30min后开始。 3.4 沉降菌计数： 3.4.1 采样点数目及其布置： 沉降法的最少采样点数可按表1确定。 表1 最少采样点数目 面积m3 洁净度级别（3000000） 10 ≥10-20 ≥20-40 ≥40-100 2 2 2 2 注：表中的面积，对于单向流