XPD和PPARγ对HepG2增殖及ERG表达影响.pdfVIP

摘要 II 摘 要 目的: 观察人着色性干皮病基因 D(XPD)对癌基因 ERG(Ets Related Gene)表 达的影响，并探讨其和过氧化物酶增殖物激活受体(PPARγ)对肝癌细胞 HepG2 增殖的影响. 方法：本实验采用脂质体 LipofectamineTM 2000 瞬时转染法，在肝癌细胞 HepG2 中分别瞬时转入空载质粒 pEGFP-N2 和重组质粒 pEGFP-N2/XPD，转染 24 小时后，在处理组中加入 10μmol/L 的 GW9662(PPARγ 抑制剂)，孵育 48 小时 后，实验 6 组分别用 RT-PCR(半定量逆转录聚合酶链反应)和 Western blotting(蛋 白印迹)法依次检测 XPD 基因、PPARγ基因和 ERG 基因的 mRNA 和蛋白表达量 的变化。本实验分为 6 组：空白对照组、脂质体组、pEGFP-N2 组、pEGFP-N2/XPD 组、pEGFP-N2/XPD + GW9662 组及 GW9662 组；实验 6 组依次用 MTT 比色法 观察肝癌细胞增殖活力；实验 6 组按次序用流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率。 结果：RT-PCR 和 Western blotting 检测提示：重组质粒 pEGFP-N2/XPD 的 转染使得 XPD 的 mRNA 和蛋白发生过表达（0.2075±0.0053，3.8042±1.0889，P 均 0.001）；XPD 表达增高使得 ERG 基因表达明显降低（0.0091±0.0006， 0.0518±0.0003，P 均 0.001），同时使得 PPARγ 表达增高（0.6294±0.0218， 0.0283±0.0009，P 均 0.001）， 而 GW9662 能抑制 XPD 这一作用。MTT 结果 显示：转染了 XPD 的肝癌细胞 HepG2，其细胞增殖活力显著降低，GW9662 能 明显削弱 XPD 这个作用（0.5839±0.0804，P 均0.001）。流式细胞仪结果显示： 与 pEGFP-N2/XPD 组比较，转染了 XPD 的实验组中 HepG2 细胞凋亡指数明显 增加，而 GW9662 能抑制 XPD 这一作用（15.3217±0.8089，P 均 0.001）。 结论：1、人着色性干皮病基因 D 能抑制 ERG 基因的表达 2、XPD 能通过 PPARγ 途径抑制肝癌细胞增殖和促进肝癌细胞的凋亡 3、XPD 是通过 PPARγ 途 径下调 ERG 的表达。 关键词：XPD；PPARγ；ERG；增殖；凋亡 万方数据 Abstract III ABSTRACT Objective：To investigate the effects of Xeroderma Pigmentosum Group D (XPD) Gene on proliferation of human hepatoma G2 cell and the expression of ERG gene. Methods: The Human hepatoma cells (HepG2) was transfected with XPD gene and vacant vector plasmid pEGFP-N2 by Lipofectamine 2000, and the cells were incubated with 10umol/L GW9662 (PPARγ inhibitor)for 48 hour. There are six groups in the study including blank control group , Lipofectamine group (Lip group ), pEGFP-N2 group (N2 group), pEGFP- N2-XPD group（XPD group), pEGFP- N2-XPD+ GW9662 group and GW9662 group. By using RT-PCR and Western blotting, the expression levels of XPD， ERG，PPARγand cdk7 were detected. The apoptosis rate were examined with flow cytometry, and the cell viability was detected by MTT. Results:The expressions of XPD mRNA and protein were increased remarkable after pEGFP- N2-X