益气化瘀清热方及其拆方影响大鼠MsC表达p38MAPK、Samd3及TGFβ1研究.pdfVIP

目 录 摘 要- 1 - Abstract - 2 - 前 言- 4 - 实验一 不同含药血清影响大鼠MsC 表达p38MAPK mRNA 的研究- 6 - 1 实验材料- 6 - 1.1 实验细胞- 6 - 1.2 实验试剂- 6 - 1.3 实验仪器- 7 - 2 实验方法- 8 - 2.1 含药血清制备- 8 - 2.2 主要溶液的配置 - 8 - 2.3 大鼠肾小球系膜细胞复苏、培养、传代和冻存- 8 - 2.4 细胞分组- 9 - 2.5 细胞处理及细胞收集- 9 - 2.6 RT-PCR - 9 - 2.7 统计学方法 - 11 - 3 实验结果 - 11 - 实验二不同含药血清影响大鼠 MsC 表达p38MAPK 、Smad3 及 TGF-β1 蛋白的研 究- 13 - 1 实验材料- 13 - 2 实验方法- 14 - 3 实验结果- 16 - 理论探讨- 20 - 1 现代医学对MsPGN 的认识- 20 - 1.1 MsC 在肾脏病中的作用 - 20 - 1.2 p38MAPK 在肾脏病中的作用- 21 - 1.3 smad3 在肾脏病中的作用- 21 - 1.4 TGF-β1 在肾脏病中的作用 - 22 - 2 祖国医学对MsPGN 的认识- 22 - 3 导师学术思想- 23 - 万方数据 4 本实验研究结论 - 24 - 5 本实验存在问题 - 25 - 结 论 - 26 - 参考文献 - 28 - 附 录 - 31 - 附录1 细胞培养图片 - 31 - 附录2 文献综述 - 33 - 万方数据 缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 cDNA complementary 互补DNA Deoxyribonucleic acid DEPC Diethy pyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 EDTA Ethylenediamine tetraacetic 乙二胺四乙酸 acid P38MAPK p38mitogen -activated p38 有丝分裂原活化蛋白激 protein kinases 酶 TGF-β transforming growth factor 转化生长因子-β beta TGF- β1 transforming growth factor 转化生长因子-β 1 beta- 1 LPS lipopolysaccharide 脂多糖 mRNA Messenger ribonucleic acid 转运核糖核酸 MsC primary mesangial cells 肾小球系膜细胞 MsPGN Mesangial proliferative 系膜增生性肾小球肾炎 glomerulonephritis One-way ANOVA One-way analysis of 单因素方差分析 variance PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PMSF Phenylmethanesulfonyl 苯甲基磺酰氟 fluoride PVDF polyvinylidene fluoride 聚偏二氟乙烯 TBST Tris-buffered saline and TBST 缓冲液 0.1%Tween TEMED tetramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 FBS fetal calf serum 胎牛血清 TW Tripterygium Wilfordii 雷公藤多苷 hook.f FN Fibronectin 纤维连接蛋白 万方数据 摘 要 摘 要 目的 通过脂多糖的 （lipopolysaccharide ，LPS ）刺激，诱导体外培养的大鼠肾小 球系膜细胞 primary mesangial cells ，MsC 增生，观察益气组中药（由黄芪和党参 组成）、化瘀组中药（由丹参和水蛭组成）、清热组中药（由黄芩和蒲公英组成）、 复方组中药（由以上全部中药组成）和雷公藤多苷对大鼠MsC 表达p38MAPK 、 Samd3 及 TGF-β1 的比较研究，探讨益气、化瘀、清热中药对增生性肾小球肾炎 的作用机理。 方法 体外培养大鼠 MsC ，利用脂多糖诱导其增生，形成 MsC 增生模型，将造 模成功后的MsC 随机分为控制组、模型组、对照组、益气组、化瘀组、清热组、 复方组、雷公藤多甙组，分别加入各类含药血清继续培养，采用 RT-PCR 法检测 各组含药血清大鼠对MsC 表达p38MAPK mRNA 的影响；采用Wersten Blot 法检