肺炎支原体LAMPs激活Nrf2及其对HO1和NQO1表达影响.pdfVIP

1 目 录 中文摘要 4 ABSTRACT 6 论 文 正 文 8 1 前言 9 2 实验材料 11 3 实验方法 14 4 实验结果 23 5 讨论 30 6 结论 32 参考文献 33 综述 38 读硕期间论文 44 致谢 45 万方数据 2 主要英文缩写 缩写词 全 称 中 文 名 称 CHX cycloheximide 放线菌酮 CKs cytokines 细胞因子 COX-2 cyclooxygenase-2 环氧化酶-2 ECL enhanced chemiluminescence 增强化学发光 FBS fatal bovine serum 胎牛血清 Glu glucose 葡萄糖 HO-1 Heme oxygenase-1 血红素氧合酶-1 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 KD/kDa kilodalton 千道尔顿 LAMPs lipid-associated membrane proteins 脂质相关膜蛋白 LPS lipopolysaccharide 脂多糖 MALP-2 Macrophage-activating lipopeptide-2 巨噬细胞活性脂肽-2 Mg Mycoplasma genitalium 生殖支原体 Mp Mycoplasma pneumoniae 肺炎支原体 NQO1 quinine oxidoreductase 醌氧化还原酶 Nrf2 NF-E2-related factor 2 核因子相关因子-2 OD optical density 光密度 PBS phosophate buffered saline 磷酸盐缓冲液 RNAase ribonuclease RNA 水解酶 rpm revolutions per minute 每分钟转数 RT-PCR Real time polymerase chain reaction 实时定量聚合酶链式反应 SDS sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠 siRNA small interfering RNAs 小干扰 RNA 片段 TBS Tris-buffered saline Tris 缓冲盐溶液 TBST Tween-20/ Tris-buffered saline 吐温 20/Tris 缓冲盐溶液 TEMED tetramethylethylenediamine 四甲基乙二胺 万方数据 3 TLR toll-like receptor Toll 样受体 Tris Tris-(hydroxymethyl) aminomethan 三羟甲基氨基甲烷 万方数据 4 肺炎支原体 LAMPs激活 Nrf2及其对 HO-1和 NQO1 表达的影响 硕士研究生：谭田平 导 师：朱翠明 教授 中文摘要 目的：肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，Mp）感染所引起的一系列 炎症反应很大程度上是其细胞膜上的脂质相关膜蛋白（lipid-associated membrane proteins, LAMPs）所致。本研究旨在探讨 MP LAMPs 能否激活人单核细胞系 THP-1 中的核因子 NF-E2 相关因子 2（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2， NF-E2 - related factor2，Nrf2），诱导血红素氧合酶-1（Hemeoxygenase，HO-1） 和醌氧化还原酶（NADPH: quinine oxidoreductase，NQO 1）的表达。 方法：培养 Mp M129 菌株至对数生长期，离心收集沉淀，抽提 LAMPs， BCA 法测定 LAMPs 浓度。体外培养 THP-1 细胞，CCK-8 检测 LAMPs 的细胞毒 性；Western blot 检测 LAMPs 刺激 THP-1 细胞表达 HO-1 及 NQO1 的剂量依赖 性及时间依赖性；比色法分析 HO-1 酶活性改变情况；Western blot 及免疫荧光技 术检测 LAMPs 刺激 THP-1 后 Nrf2 在细胞核及胞浆中的表达以了解 Nrf2 的核转 位。实时定量逆转录 PCR（qRT-PCR）检测 LAMPs 刺激 Nrf2 siRNA 预处理的 THP-1 细胞 HO-1 和 NQO1 mRNA 的表达水平。 结果： 1. LAMP