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γ-氨基丁酸 A受体α1和γ2亚单位调质对未成熟鼠反复惊厥发作的远期作用 中文摘要 I γ-氨基丁酸 A受体α1和γ2亚单位调质对未成熟鼠反 复惊厥发作的远期作用 中文摘要 目的：探讨γ-氨基丁酸 A受体（GABA(A)受体）调质（激动剂氯硝西泮(CZP)与 拮抗剂氟马西尼(FMZ)）对未成熟鼠反复惊厥(Recurrent seizures，RS)发作后，海马内 GABA(A)受体α1和γ2亚单位的表达变化及其远期神经行为学影响，以了解 GABA(A) 受体调质在未成熟鼠惊厥脑损伤中的干预作用及其意义。 方法：出生 5d（Postnatal day 5，用 P5表示，下同）的健康Waster大鼠 160只， 随机分为五组：正常对照组（CONT组，n=32）、惊厥组（RS组，n=32）、惊厥后 生理盐水干预组（NS干预组，n=32）、惊厥后氯硝西泮干预组（CZP干预组，n=32）， 惊厥后氟马西尼干预组（FMZ干预组，n=32）。除 CONT组外其余四组惊厥动物模 型为每日反复吸入三氟乙醚诱导大鼠惊厥发作 5次，每两次间隔时间 2h，连续 5d； CONT组大鼠进行同样的操作但不吸入三氟乙醚。CZP干预组和 FMZ干预组大鼠于 惊厥结束后１d起分别给予氯硝西泮 6.0mg/(kg·d) 、氟马西尼 1.0mg/(kg·d)干预，连 续 5d；NS干预组大鼠于惊厥结束后１d起给予等量生理盐水灌胃干预，连续 5d。在 不同的时间通过负趋地性、前肢悬挂、平面翻正、悬崖回避实验、旷场实验、平衡木 实验以及 Morris水迷宫实验等进行评价其神经行为情况；并将各组大鼠分别于末次 干预后当天（即 P15）及 20d（即 P35）、55d（即 P70）留取海马组织，采用免疫印 迹技术及荧光定量 RT-PCR法分别测定大鼠海马 GABA(A)受体α1和γ2亚单位的表 达。 结果：1、神经行为学检测结果：（1）悬崖回避实验：RS组及 NS干预组大鼠 从木板边缘退回或转身所需的时间较 CONT组均明显延长(P0.05)；CZP干预组大鼠 从木板边缘退回或转身所需的时间较 NS干预组均明显延长(P0.05)；FMZ干预组大 鼠从木板边缘退回或转身所需的时间较 NS干预组无显著性差异(P0.05)；（2）负趋 地性实验：RS组及 NS干预组大鼠倒转 180°所需时间较 CONT组明显延长(P0.05)。 CZP干预组大鼠倒转 180°所需时间较 NS干预组均明显延长(P0.05)；FMZ干预组 中文摘要 γ-氨基丁酸 A受体α1和γ2亚单位调质对未成熟鼠反复惊厥发作的远期作用 II 大鼠倒转 180°所需时间较 NS干预组明比较无显著性差异(P0.05)；（3）旷场试验 表明，中央格停留时间 CZP干预组大鼠较 NS干预组均明显延长(P0.05)；中央格停 留时间 FMZ干预组大鼠较 NS干预组无显著性差异；跨越方格数 CZP干预组大鼠较 NS干预组均显著减少(P0.01)。跨越方格数 FMZ干预组大鼠较 NS干预组无显著性 差异(P0.05)；（4）平衡木试验提示，RS组及 NS干预组大鼠平均评分均明显低于 CONT组（P 0.05），CZP干预组大鼠较 NS干预组评分均明显降低(P 0.05)。FMZ 干预组大鼠较 NS干预组评分无显著性差异(P0.05)。 2、学习记忆能力（ Morris水迷宫检测结果）：（1）登台潜伏期：经过连续 5 天（P61-P65）定位航行试验，五组鼠的逃避潜伏期均呈逐渐缩短的趋势。试验第 3d 和 4d，RS组和 NS干预组大鼠寻找平台的时间明显长于 CONT组(P0.05)；CZP干 预组大鼠寻找平台的时间明显长于 NS干预组 (P0.05)；第 5d时 RS组和 NS干预组 大鼠寻找平台的时间均显著长于 CONT组(P0.01)；CZP干预组大鼠寻找平台时间显 著长于 NS干预组 (P0.01)；FMZ干预组大鼠寻找平台时间与 NS干预组相比较无显 著性差异（P0.05）。（2）搜寻策略：CONT组大鼠多采用直线和趋向式策略，而 RS组、NS干预组、CZP干预组和 FMZ干预组大鼠则多以边缘式和随机式为主。（3） 穿越平台次数：RS组和 NS干预组大鼠 60s内穿越平台次数较 CONT组均明显减少 (P0.05)；CZP干预组大鼠 60s内穿越平台次数较NS干预组均明显减少(P0.05)。FMZ 干预组大鼠 60s内穿越平台次数与 NS干预组相比较无显著性差异（P0.05）。 3、Western blot检测结果：随着大鼠日龄的增长，五组大鼠海马内 GABA(A)受 体α1和γ2亚单位的蛋白表达水平均逐渐升高。末次干预后当天（即 P15），CZP干 预组大鼠 GABA(A)受体α1亚单位蛋白表达水平与 NS干预组