QC-FF-0019 薄层色谱法标准操作规程.docVIP

目的：建立薄层色谱法标准操作规程 范围：本规范适用于薄层色谱法检查 内容： 1.简述 薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 2.仪器与材料 2.1薄层板 2.1.1自制薄层板 除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无黏合剂和含黏合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻板上,后者系在固定相中加入一定量的黏合剂，一般常用10%～15％煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加热4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液(0.5%～0.7％)适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。也有含一定固定相或缓冲液的薄层。涂布器应能使固定相或载体在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 2.1.2市售薄层板 分为普通和高效薄层板。 2.2点样器 有手动、半自动或自动点样器，一般采用微量注射器或定量毛细管。 2.3展开室 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 2.4显色剂 按各个品种项下规定的操作。 2.5显色装置 喷雾显色可使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或适宜的玻璃缸代替；碘汽熏碘显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。 2.6检视装置 为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365nm）光源及相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。 3操作方法 3.1薄层板制备 3.1.1自制薄层板 除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。表面应均匀、平整、光滑，无麻点，无气泡，无破损及污染。 3.1.2市售薄层板 市售薄层板 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的层板底边的硅胶层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行展开预洗，活化后，放在干燥器中备用。 3.2点样 除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.3展开 展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中,浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中）,密封缸盖,待展开至规定距离(一般为10～15cm),取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。 展开可以向一个方向进行，即单向展开；也可以进行双向展开，即先向一个方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动90°，再用原展开剂或另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。 3.4显色与检视 荧光薄层板可用荧光淬灭法；普通薄层板，有色物质可在日光下直接检视；无色物质可用物理或化学方法检视。物理方法是检出斑点的荧光颜色及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻板，在日光下检视。 4.系统适用性试验 按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，检测斑点的检测灵敏度、比移值（Rf）和分离效能应符合规定。 4.1检测灵敏度 用于杂质检查时，采用对照溶液经稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。 4.2比移值（Rf ）f=从基线至展开斑点中心的距离/从基线至展开剂前沿的距离 可用计算供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。 4.3分离效能 鉴别时，对照品与结构相似的药物对照品制成的混合对照溶液按规定方法展开后，应显示两个清晰分离的斑点。杂质检查时，杂质对照品与主成分制成的混合对照溶液按规定方法展开后，应显示两个清晰分离的斑点，或待测成分与相邻的斑点应清晰分离。5测定法 5.1鉴