X8月季的花药培养要点.pptVIP

专题三 植物的组织培养技术 课题2 月季的花药培养 秋水仙素处理 花药离体培养 单倍体育种 AABB×aabb P AaBb F1 AAbb AB Ab aB ab 单倍体 植株 AABB AAbb aaBB aabb 原理：细胞的全能性 植株矮小，高度不育 月季(Rosa chinensis?Jacq.) 玫瑰(Rosa rugosa?Thunb.) 一年多生，花朵较大，花茎光滑、茎上刺少而粗，香味寡淡，果实圆形。 一年一生，花朵较小，花茎有刚毛、茎上刺多而小，香味浓郁，果实扁圆形。 被子植物：种子有果皮和种皮包被的植物。 被子植物和裸子植物 裸子植物：种子没有果皮，但有种皮包被的植物。 实例：向日葵、梨、月季等开花并结果的植物。 实例：松、杉、柏等。 花的结构 花丝：输送营养 花药：囊状结构，内有很多花粉(细胞） 2、花粉母细胞(小孢子母细胞) 花粉(未成熟) 即：单倍体的生殖细胞 3、发育阶段：四分体时期、单核期、双核期 （一）被子植物的花粉发育 1、雄蕊 基础知识 减数分裂 花粉管细胞核 生殖细胞核 花粉发育过程图 小孢子母细胞 花粉母细胞 4个小孢子 减数分裂 小孢子四分体时期 单核居中期 单核靠边期 双核期 有丝分裂 2个精子 有丝分裂 营养细胞 单核期 生殖细胞 1花粉母细胞（2n） 4个小孢子(小孢子四分体)（n） 减分 有分 1个花粉管细胞核（n） 1个生殖细胞核（n） 有分 2个精子 单核居中期（n） 单核靠边期（n） 即4个单倍体细胞 双核期 单核期 基因型相同 雌蕊的结构 （二）产生花粉植株(单倍体植株)的两种途径 花粉 花粉 胚状体 愈伤组织 丛芽 生根 移栽 脱分化 分化 再分化 诱导 脱分化 说明：两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度的配比。 基础知识 花粉 花粉 胚状体 愈伤组织 丛芽 生根 移栽 脱分化 分化 再分化 诱导 脱分化 基础知识 胚状体(体细胞胚或花粉胚） 组织培养过程中，某些离体的体细胞或花粉细胞转变成的与胚非常相似的结构。(也具有胚芽、胚根、胚轴等结构） 胚状体的发育过程和正常胚类似。 （二）产生花粉植株(单倍体植株)的两种途径 （三）影响花药培养的因素 1、材料的选择 此外，亲本生长条件、材料低温预处理、接种密度等 2、培养基的组成 从花药所处时期看： 从花粉发育时期看： 从花蕾开放程度看： 初花期(花期早期)的花药 单核期(单核靠边期)的花粉 完全未开放的花蕾 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 为什么选择完全未开放的花蕾作花药离体培养的材料？ 花瓣松动，微生物可能侵入到花药，给消毒带来困难。 2、含菌少、易消毒 1、可挑选到单核期的花药 实验操作 1、材料的选取 2、材料的消毒 3、接种和培养 4、鉴定和筛选 1、材料选取 通过镜检确定花粉是否处于适宜的发育期： 最常用的方法：醋酸洋红法(将细胞核染成红色） 某些植物的花粉细胞核不易着色：焙花青-铬矾法， 将花粉细胞核染成蓝黑色。 从花药的时期看： 从花粉发育期看： 从花蕾开程度看： 选择适宜的月季花药 初花期的花药 单核期的花粉 完全未开放的花蕾 2、材料的消毒 花 蕾 （70％酒精） 约30s （无菌水） 清洗 （无菌吸水纸） 吸干水分 （0.1％氯化汞溶液） （无菌水） 冲洗 提示： 用于培养花药的花蕾，外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态，所以只需将整个花蕾消毒即可。 思考：月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。 在无菌条件下除去花蕾的萼片和花瓣，取出花药 b、要彻底去除花丝 取出花药后立即接种于培养基上，每瓶接种花药7-10个。 ①剥取花药 a、尽量不损伤花药 ②接种 注意： 3、接种和培养 温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 ③培养 培养20-30天后，花药分裂形成愈伤组织或胚状体 若形成胚状体：一个花药会产生大量幼小植株，必须尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上。 若形成愈伤组织：应及时将愈伤组织转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组的数目常常会发生改变。（主要原因是营养核和生殖核融合造成的） 4、鉴定和筛选 菊花组织培养与月季花药离体培养的比较 比较项目 菊花组织培养 月季花药离体培养 原理 植物激素 染色体倍性的鉴定 材料 培养结果 细胞的全能性 体细胞 花药(花粉） 正常植株 单倍体植株 不必添加