第二章染色体与DNA2要点.ppt

第三节 DNA的复制 DNA的复制与细胞分裂之间存在密切关系。DNA的复制起始保证了细胞进一步分裂，复制完成才能引发细胞分裂，细胞分裂结束才能开始新一轮DNA复制。 DNA的复制（replication）是指以原来的DNA分子为模板合成出相同的DNA分子的过程。 DNA的双螺旋结构对于维持遗传物质的稳定性和复制的准确性是极为重要的。 DNA的复制概况 一、DNA的半保留复制 1、概念： DNA复制时每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称半保留复制（semiconservative replication ）。 Distinguishing between Models of DNA Replication 基于DNA双螺旋结构，曾出现有三种不同复制模式的假说： Semi-conservative replication Conservative replication Dispersive replication (a) Hypothesis 1: Semi-conservative replication (b) Hypothesis 2: Conservative replication Intermediate molecule (c) Hypothesis 3: Dispersive replication Alternative Hypotheses for DNA Synthesis 实验依据: 1958年，Meselson和Stahl用15N同位素标记和CsCl密度梯度离心法。 Matthew Messelson Franklin Stahl 半保留复制是双链DNA普遍采用的复制机制。 意义：半保留复制说明DNA在代谢上的稳定性。 中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生分子遗传学入学考试： 请设计一个实验来证明DNA复制是以半保留方式进行的. 二、DNA复制的起点、方向和方式 基因组能独立进行复制的单位称为复制子（replicon） 每个复制子都含有控制复制起始的起点（origin） 可能还有终止复制的终点（terminus） 1、原核细胞的染色体和质粒以及真核细胞中的细胞器DNA：有固定起点双向复制，环状DNA复制形成θ形结构。 2、真核生物染色体DNA ：复制时多个起始点。 原核生物细胞的基因组只有一个复制子。细菌内的质粒是一个自主复制的环状DNA基因组，构成一个独立的复制子。 真核生物的DNA分子上有多个复制子。 复制正在发生的位点叫做复制叉（replication fork）或生长点（growing point）。 DNA复制的方向 复制可单向进行，也可以双向进行，这取决于在起点有一个还是两个复制叉。 DNA复制的方式 大多数生物体内DNA的复制都以双向等速方式进行。但枯草杆菌两个复制叉的移动是不对称的。质粒ColEⅠ的复制完全是单向进行的。 大多数生物体内的DNA复制都以对称方式进行，即DNA分子的两条链同时复制。但也有在一定时期内DNA只复制一条链的情况。例如线粒体的D－环复制和一些细菌噬菌体的滚环复制方式。 环形DNA双链的复制方式 θ型： 滚环型：噬菌体 D－环型：线粒体 原核生物只有一个复制单位，其复制是从一个起始点开始，同时向两个方向进行，称为双向复制。复制中的DNA成为? 状。 大肠杆菌的ori是一个245 bp的富含AT的序列。 Displacement loop 滚环和D-环的存在表明，可以只以一条链为模板起始DNA的合成。 Requirements Enzyme: DNA Polymerase DNA Template 3’ OH (primer of DNA or RNA) Deoxynucleoside triphosphates: dATP, dGTP, dCTP, dTTP Synthesis is 5’ to 3’ DNA Synthesis 三、DNA聚合酶与DNA聚合反应 DNA的复制是以DNA为模板，在DNA聚合酶（DNA polymerase）催化下进行的DNA合成反应。 原核细胞 DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 真核细胞 DNA聚合酶α、β、γ、δ、ε DNA聚合酶性质： 以四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）为底物催化 合成DNA； 反应需要模板的指导； 不能起始合成新的DNA链，需要引物存在； 催化DNA合成的方向是5‘－3’； 产物的性质与模板相同。 3 Completely single stranded 5 G A A T C T