基因工程实验-20100919要点.ppt

基因工程实验 周景文 江南大学 生物系统与生物加工研究室 April 9, 2017 概述 PCR DNA/RNA的凝胶电泳 质粒提取 基因组提取 常用工具酶 怎样把一个基因连接到质粒上？ 怎样把几个片段连接到一起？ 基因敲除 过量表达 质粒的结构 常用软件 常用网址 常用供应商 1. PCR 酶的选择： 普通的DNA聚合酶：Taq末端有A尾，可以直接用于TA克隆，连接到T载体上； 高保真的DNA聚合酶：Pfu (Pyrobest)末端无A尾，无法直接连接至T载体上。 反应条件的选择： Mg2+: 过低反应无法进行，过高易产生错配； Mn2+: 使错配率增加，用于易错PCR，进行定向进化。 特殊的PCR： 融合PCR(与SOE-PCR原理一致)： 见文献： Shevchuk, N. A., A. V. Bryksin, et al. (2004). Construction of long DNA molecules using long PCR-based fusion of several fragments simultaneously. Nucleic Acids Res 32(2): 12. Szewczyk, E., T. Nayak, et al. (2006). Fusion PCR and gene targeting in Aspergillus nidul