影响酶活性的因素要点.pptx

生物化学实验基本操作 一. 玻璃仪器的洗涤 在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。 ㈠ 常用的洗涤方法： 1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干备用。 2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上； （2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后干燥。 二.刻度吸量管 刻度吸量管的种类： 按容量规格来分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等数种。其精密度按不同的容积可达移取量的0.1~1%。通常将管身标明的总容量分刻为100等分。因此，10ml的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余类推。 刻度吸量管的正确使用方法： 用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖端伸入试液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以上时，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制试液的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直，使右眼与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试液面缓慢降落，至管内试液弯月面的最低点与吸量管的刻度线相齐为止。然后将吸量管插到需加试剂的容器中，让尖端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。液体流完后再等15秒钟，捻动一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一下吸量管移去）。 三. 溶液的混匀 ㈠混匀的目的： ⒈使反应体系内的各种物质分子很好地互相接触，充分进行反应； ⒉使欲稀释的溶液成为浓度均一的溶液。 ㈡ 混匀的方法通常有以下几种： ⒈使盛器作离心运动。 ⒉左手持试管上端，用右手指轻击试管下半部，使管内溶液作旋转运动。 ㈢ 混匀的注意事项： ⒈防止盛器内的液体溅出或被污染。 ⒉严禁用手指堵塞管口或瓶口震荡混匀。 实验报告的书写 1.实验目的 2.实验原理 3.实验步骤 4.实验结果 5.实验分析 影响酶作用的因素 一、实验目的 通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。 二、实验原理 唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用的底物是淀粉。 淀粉 I2：蓝色 淀粉酶 糊精（大分子，小分子） 紫红色、暗褐色或红色 淀粉酶 麦芽糖+少量葡萄糖 棕黄色，碘本身颜色 淀粉水解过程中与碘反应，其颜色的变化，可以指示淀粉的水解程度，也可以由此判断淀粉酶活力强弱。 三、实验试剂及器材 1.试剂 1%淀粉溶液 碘液 pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液 1% CuSO4溶液 1% NaCl溶液 Na2SO4溶液 2. 器材 恒温水浴锅 电炉 比色板 四、实验操作 1.唾液淀粉酶的制备 取干净的纸杯，盛上蒸馏水。 用蒸馏水漱口。 口含约20ml蒸馏水，2-3分钟后，吐入一干净试管中，棉花过滤。 管别 淀粉管 稀释唾液 蒸馏水 同时放于30-40oC水浴中 2分钟后 对照组 3ml —— 2ml 实验组 3ml 2ml —— 2分钟后做碘液检查：在比色板上滴上碘液，于二管各取一滴加入，看是否开始水解，以后每隔2分钟再取一滴加以检查，约6-10分钟后实验管水解过程由蓝紫 红棕 无色，此时水解完成。但对照管仍蓝色。 观察两管淀粉在水解后的乳样光泽 分别取两管溶液5滴，加入班氏试剂0.5ml，加热煮沸，观察有何现象发生。 2.pH对唾液淀粉酶活性的影响 一、实验目的 了解pH对酶活性的影响及最适pH的定义。 二、原理 酶的催化活性与环境pH有密切关系，通常各种酶只在一定pH范围内才具有活性，酶活性最高时的pH，称为酶的最适pH，高于或低于此pH时酶的活性都逐渐降低。不同酶的最适pH不同。酶的最适pH不是一个特征性的物理常数，对于一个酶，其最适pH因缓冲液和底物的性质不同而有差异。 操作 管号